|
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
Интеллектуальная Система Тематического Исследования НАукометрических данных |
||
Бесклеточная продукция внеклеточного домена никотинового ацетилхолинового рецептора человека α7 типа в функционально-активной формедипломная работа (Магистр)
- Научные руководители: Люкманова Е.Н., Шулепко М.А.
- Автор: Бутенко Иван Олегович
- Тип: Магистр
- Организация, в которой проходила защита: МФТИ
- Год защиты: 2013
- Аннотация: 1. Созданы генетические конструкции для продукции водорастворимого внеклеточного домена α7 субъединицы нАХР человека (a7WS) и домена с первой трансмембранной спиралью (a7WSM1) в бесклеточной белоксинтезирующей системе в виде осадка реакционной смеси. 2. Разработаны системы бесклеточной продукции a7WS и a7WSM1 в виде осадка трансляционной смеси (ТС) с выходом ~ 2 мг/мл ТС. 3. Разработан протокол солюбилизации и очистки a7WSM1 из осадка ТС с помощью различных детергентов. Наибольшей стабильностью обладал препарат a7WSM1 в мицеллах LMPG. Методами КД- и ЯМР-спектроскопии показано наличие вторичной структуры a7WSM1 в окружении LMPG, близкой к расчетной. Показано наличие функциональной активности домена в окружении мицелл LMPG. 4. Разработан протокол ренатурации a7WS из осадка реакционной смеси, способного специфически взаимодействовать с α-бунгаротоксином. 5. Разработан протокол получения комплексов ЛБН с a7WSM1, обладающих высокой стабильностью и способностью специфически взаимодействовать с α-бунгаротоксином. Проведено сравнение активности препаратов домена, полученных разными способами. Показано, что наиболее оптимальной средой для стабилизации функционально-активной конформации внеклеточного домена α7 субъединицы нАХР являются липид-белковые нанодиски на основе РОРС.
- Добавил в систему: Люкманова Екатерина Назымовна