|
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
Интеллектуальная Система Тематического Исследования НАукометрических данных |
||
Белковая инженерия структуры активного центра формиатдегидрогеназы из бактерий Pseudomonas sp. 101дипломная работа (Специалист)
- Научные руководители: Тишков В.И., Пометун А.А.
- Автор: Галаничева Наталия Павловна
- Тип: Специалист
- Организация, в которой проходила защита: МГУ имени М.В. Ломоносова
- Год защиты: 2021
- Аннотация: Формиатдегидрогеназы (ФДГ) представляют собой разнообразную группу ферментов, обнаруженных как у эукариот, так и у прокариот, которые катализируют окисление формиата до CO2. В отличие от большинства ФДГ из аэробных бактерий, ФДГ из анаэробов содержат кофакторы металлов. Изучение ФДГ началось в 1950-х годах и до сих пор продолжаются работы по исследованию свойств рекомбинантных ферментов из различных организмов, в частности, для дальнейшего использования в промышленных масштабах. На настоящее время дегидрогеназы нашли своё применение в синтезе оптически активных соединений. Использование ферментов позволяет добиться получения чистых хиральных соединений, в то время как классические катализаторы позволяют получить только смесь рацематов, что недопустимо в фармацевтическом производстве. Из NAD+-зависимых ферментов ФДГ является наиболее перспективным для использования в биотехнологии. Сопоставляя ФДГ с другими NAD+-зависимыми ферментами, такими как алкогольдегидрогеза и лактатдегидрогеназа, её преимущество заключается в низких значениях константы Михаэлиса по коферменту [1]. По сравнению с глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназой, имеющей также низкие значения по NAD+, ФДГ является катализатором реакции образования углекислого газа из формиата, которая проходит необратимо. Также это преимущество позволяет использовать ФДГ в системе регенерации дорогого кофактора NAD(P)H. Необратимость реакции является одним из важных преимуществ для использования в промышленности. Обычно ферментативные реакции обратимы, что приводит к неполному превращения субстрата в продукт и, как следствие, использование становится экономически невыгодным. Также летучий продукт окисления, углекислый газ, не загрязняет целевой продукт, а формиат – достаточно недорогой субстрат. Ключевое преимущество ФДГ из бактерий заключается в хорошей термостабильности и высоких значениях каталитической константы по сравнению с растительными и дрожжевыми ФДГ. Однако их значительный недостаток заключается в высоких значениях константы Михаэлиса по NAD+. Ранее в нашей лаборатории были получены мутантные ФДГ из бактерий Pseudomonas sp. 101 c точечными заменами, в результате чего удалось повысить температурную стабильность, а также улучшить константы Михаэлиса по обоим субстратам. Целью данной работы является объединение точечных замен, получение многоточечных мутантов и исследование их свойств.
- Добавил в систему: Тишков Владимир Иванович