|
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
Интеллектуальная Система Тематического Исследования НАукометрических данных |
||
Создание тест-системы для поиска новых ингибиторов взаимодействия Ku с ДНКдипломная работа (Специалист)
- Научный руководитель: Королев Сергей Павлович
- Автор: Мироненко Андрей Владимирович
- Тип: Специалист
- Организация, в которой проходила защита: МГУ имени М.В. Ломоносова
- Год защиты: 2019
- Аннотация: Белок Ku – гетеродимерный ДНК- и РНК-связывающий белок, присутствующий практически во всех организмах. Способность связываться с ДНК и РНК обуславливает участие Ku во множестве клеточных процессов, в частности репарации двуцепочечных разрывов ДНК путем негомологичного соединения концов и транскрипции различных генов, в том числе генов вируса иммунодефицита человека 1. Это, потенциально, позволит использовать ингибиторы связывания Ku с ДНК для повышения эффективности лучевой терапии рака, генной терапии, а также при лечении ВИЧ-инфекции. На данный момент в литературе описаны ингибиторы Ku: соединение Vitas-M STL127705, принадлежащее к классу диазинопиримидин-2,4-дионов, и ряд соединений, принадлежащих к классу арилпиразонов. Целью данной работы являлось создание высокопроизводительной тест-системы для поиска новых ингибиторов связывания Ku с ДНК. Для этого были решены две задачи. Во-первых, с помощью метода метадинамики был определен сайт связывания ингибитора Vitas-M STL127705 с Ku. Показано, что для взаимодействия с данным ингибитором важны остатки Tyr375Ku70, Asn479Ku70, Glu265Ku80 и Leu263Ku80. Наличие информации о сайте связывания известного ингибитора позволит в дальнейшем упростить компьютерный поиск потенциальных ингибиторов Ku. Во-вторых, была разработана высокопроизводительная система скрининга потенциальных ингибиторов Ku. В процессе работы была получена генетическая конструкция для экспрессии белка Ku, содержащего His6-таг на С-конце Ku80. Помимо этого, с помощью метода торможения в геле был протестирован ряд аналогов STL127705 и производных фуллеренов C60 на наличие способности ингибировать связывание Ku с ДНК. Был обнаружен новый класс ингибиторов взаимодействия Ku с ДНК – производные фуллеренов C60, содержащие карбоксильные группы, присоединенные к фуллеренам через различные линкеры. В основе разрабатываемой тест-системы лежало измерение флуоресценции флуоресцентно-меченной ДНК, связывающейся с иммобилизованным Ku на Ni2+-конъюгированных планшетах в присутствии изучаемого ингибитора. Для этого были подобраны условия для иммобилизации Ku на Ni2+-конъюгированных планшетах и связывания флуоресцентно-меченной ДНК с иммобилизованным Ku в присутствии ингибиторов Ku. Созданная тест-система была валидирована с использованием соединений vi-286-M6K и OKR-350, принадлежащих к обнаруженному в работе классу фуллеренов-ингибиторов Ku. В дальнейшем, мы планируем использовать полученные в результате выполнения дипломной работы данные для докинга баз соединений в обнаруженный сайт связывания c последующим скринингом соединений-потенциальных ингибиторов Ku с использованием созданной тест-системы.
- Добавил в систему: Королев Сергей Павлович