«Исследование совместного функционирования активных центров ангиотензин-превращающего фермента человека при гидролизе субстратов с внутренним тушением флуоресценции»дипломная работа (Специалист)
Аннотация:АПФ - цинк-зависимая пептидаза, отщепляющая С-концевой дипептид от олигопептидных субстратов. Соматическая форма АПФ содержит два домена. Каждый из доменов содержит активный центр, который принимает участие в катализе. Помимо соматической формы в организме присутствует существуют 2 однодоменные формы: тестикулярная, соответствующая С-домену, и N-домен.
Известно, что при гидролизе субстратов активные центры соматического фермента могут функционировать как два независимых фермента, или, наоборот, могут оказывать сильное негативное влияние на функционирование друг друга, что определяется структурой лиганда, в частности его длиной.
Несколько лет назад был предложен новый перспективный класс субстратов для определения активности АПФ. Субстраты такого рода крайне привлекательны в использовании, так как они делают возможным наблюдение за реакцией в реальном времени без какой-либо модификации флуорофора. Также они позволяют производить измерения с высокой чувствительностью, что позволяет определять малые концентрации фермента. В нашей лаборатории уже получены данные по гидролизу данных субстратов под действием трех форм АПФ быка. Однако, механизм гидролиза этих субстратов под действием АПФ человека до сих пор неизвестен. Знание механизма важно не только с фундаментальной точки зрения, но и для возможно определения доменной специфичности потенциальных ингибиторов АПФ, как потенциальных лекарственных препаратов, и для правильной оценки вклада доменов в общую каталитическую активность фермента. Целью данной работы является анализ механизма совместного функционирования активных центров АПФ человека в реакции гидролиза FRET-субстратов.