Аннотация:Одним из активно развивающихся направлений биотехнологии является разработка неорганических наночастиц с ферментной активностью – нанозимов. При этом большинство исследований направлено на создание миметиков наиболее используемых в анализе ферментов пероксидаз. Наиболее перспективным представляется использование каталитически синтезированных нанозимов на основе берлинской лазури. Такие нанозимы до 300 раз превосходят природную пероксидазу по каталитической константе и на порядок величины – известные наночастицы берлинской лазури. Как правило, наиболее электрокаталитически активные структуры берлинской лазури получают электрохимически. Такой подход позволяет контролировать перенапряжение реакции и, как результат, скорость осаждения. Тем не менее, электрохимический подход не был реализован для синтеза наночастиц с пероксидазной активностью.
В рамках квалификационной работы предложен метод контролируемого электрохимического проточного синтеза наночастиц берлинской лазури. Электрохимический подход позволяет получать наночастицы с узким распределением по размерам, при этом регуляция размера осуществляется путем варьирования потенциала электроосаждения и концентрации прекурсоров.
Показана высокая каталитическая активность нанозимов в реакции восстановления Н2O2 в присутствии 3,3’,5,5’-тетраметилбензидина. Каталитическая константа по ТМБ пропорциональна объему наночастиц и для нанозимов с диаметром 50 нм составляет 6,2·102 с-1, для нанозимов с диаметром 290 нм – 5,8·104 с-1. Последняя примерно в 250 раз превосходит kкат для пероксидазы из корней хрена в аналогичных условиях.
Высокая каталитическая активность электросинтезированных нанозимов в реакции восстановления пероксида водорода позволила использовать их для задач терапии. Показана эффективность применения как отдельных нанозимов «искусственная пероксидаза», так и гибридных наночастиц нанозим-миРНК в липидной оболочке для снижения активных форм кислорода в клетках.
Разработаны амперометрические сенсоры на пероксид водорода на основе электросинтезированных нанозимов. Установлено, что наилучшие аналитические характеристики могут быть достигнуты при иммобилизации нанозимов наименьшего диаметра (около 50 нм) , на 40 % превосходящие по чувствительности сенсоры на основе сплошных покрытий берлинской лазури.