|
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
Интеллектуальная Система Тематического Исследования НАукометрических данных |
||
Роль мицеллярной фазы в исследовании каталитических свойств мембранно-связанного фермента простагландин-Н-синтазыдипломная работа (Специалист)
- Научные руководители: Трушкин Н.А., Филимонов И.С., Вржещ П.В.
- Автор: Пономарева О.А.
- Тип: Специалист
- Организация, в которой проходила защита: МГУ имени М.В. Ломоносова
- Год защиты: 2011
- Аннотация: Роль мембранных белков в организме трудно переоценить. Они выполняют самые разнообразные функции и принимают участие во многих физиологических процессах. Исследование мембранных белков все еще остается сложной задачей, требующей оригинальных подходов и нетривиальных решений. Очистка и характеристика мембранных белков ставят перед исследователем целый ряд специфических проблем, с которыми он не сталкивается, работая с растворимыми белками. В частности, многие мембранные белки прочно связаны с липидным бислоем и, если и могут быть растворены в водном растворе, то теряют каталитическую активность. Поэтому для получения каталитически активных препаратов таких ферментов в ходе их выделения применяют процедуру солюбилизации, т.е. разрушения нативной мембраны детергентами и перевод глобул фермента из липидного бислоя в мицеллы детергента. Изучение механизмов функционирования мембранных белков представляет собой актуальную задачу как для медицины, так и для биотехнологии. Так, более 70% существующих лекарственных средств действуют именно на мембранные белки. В настоящее время 2-е место после антибиотиков по массовости применения среди лекарств занимают нестероидные противовоспалительные препараты (НПВП) – их принимают около 3 млн. человек ежедневно. НПВП ингибируют мембранно-связанный белок простагландин-Н-синтазу. Фермент простагландин-H-синтаза (PGHS, эндопероксид простагландин синтаза, циклооксигеназа; номер в международной классификации ферментов 1.14.99.1) осуществляет в организме млекопитающих двустадийное превращение арахидоновой кислоты в простагландин H2, который является предшественником в биосинтезе простагландинов, тромбоксанов, простациклина. PGHS классифицирована как интегральный мембранный белок, в клетке локализован на внутренней поверхности эндоплазматической сети, в раствор может перейти только в присутствии детергента. В работе с PGHS применяют неионные детергенты, способные образовывать мицеллы. Несмотря на длительное изучение и большое количество уже известной информации, многие ключевые моменты функционирования фермента PGHS окончательно не выяснены до сих пор. Недостаточное знание механизма действия лимитирует использование PGHS в биотехнологии и медицине. Частично такие «белые пятна» в информации о ферменте обусловлены сложностью изучения мембранных белков. Обзор литературных данных за 1990-2010 годы показали, что часто кинетические параметры, определяемые разными авторами, имеют существенные различия, из-за отсутствия стандартных условий исследования. Ранее было несколько раз отмечено влияние детергентов на характеристики ингибирования для PGHS. Тем не менее, влиянию концентрации детергентов на кинетические параметры простагладин-Н-синтазы посвящено очень мало работ. Что касается систематического анализа, то он был проведен только в одной работе, где в качестве детергента использовались фосфолипиды с различной длиной цепей. Таким образом, изучение влияния мицеллярной фазы на кинетические свойства PGHS все еще остается актуальной проблемой. Цель настоящей работы заключалась в исследовании влияния мицеллярной фазы, образующейся в реакционной смеси при добавлении двух жирных веществ, способных к мицеллообразованию – детергента твина-20 и субстрата фермента арахидоновой кислоты, на кинетические параметры PGHS. Прояснение вопросов взаимодействия PGHS с детергентом и субстратом in vitro представляет важность для стандартизации условий проведения экспериментов с целью изучения кинетических аспектов и характеристик ингибиторов PGHS, и, возможно, разрешит некоторые фундаментальные вопросы относительно исследуемого объекта. Для достижения данной цели были поставлены следующие задачи: - определенить кинетические параметры, такие как константа Михаэлиса и максимальная скорость циклооксигеназной и пероксидазной реакций PGHS в зависимости от концентрации детергента в реакционной смеси; - Изучить влияние концентрации детергента на взаимодействие PGHS с молекулярным кислородом; - Определить состав и размеры частиц исследуемой мицеллярной системы
- Добавил в систему: Трушкин Никита Андреевич