Аннотация:Целью работы был поиск функциональной роли белка hTERP, который закодирован в теломеразной РНК человека, ранее считавшейся некодирующей.
В ходе работы клеточные линии с нокаутом и гиперэкспрессией белка hTERP были проанализированы на устойчивость к семи различным токсическим веществам. Кроме того, были подобраны условия для обнаружения белка hTERP в супернатанте после лизиса клеток для дальнейшего проведения иммунопреципитации и коиммунопреципитации, идентифицированы возможные партнеры изучаемого белка. Большую часть работы составил поиск изменения в составе протеома клеточных линий с нокаутом по белку, с мутантным белком и контрольной линии HEK293T, в целях чего использовали такие методы, как двумерный гель-электрофорез, маркировка стабильными изотопами аминокислот в культуре клеток (SILAC), вариант масс-спектрометрии Sequential Windowed Acquisition of All Theoretical Fragment Ion Mass Spectra (SWATH). Достоверными считали результаты, определенные в ходе минимум двух из трех перечисленных экспериментов.
Результаты исследования показали, что возможные партнеры белка hTERP участвуют в процессе трансляции, а также в митохондриальном метаболизме железа. Один из выявленных белков-партнеров защищает клетку от апоптоза в условиях стресса. Также показано, что клеточные линии НЕК293Т с нокаутом и гиперэкспрессией белка hTERP не демонстрируют лучшей выживаемости по сравнению с клетками контроля при применении различных токсичных веществ. Продемонстрировано, что в клетках НЕК293Т с нокаутом белка hTERP и в клетках с мутантным hTERP по сравнению с контрольными линиями появляются изменения в процессах аминоацилирования и трансляции.