Аннотация:Митохондрии – двумембранные органеллы, имеющиеся у подавляющего большинства эукариотических клеток. Митохондрии принимают важное участие в разнообразных клеточных процессах, включая дыхание, синтез АТФ, синтез аминокислот, окисление жирных кислот, регуляцию активных форм кислорода, образование железосерных кластеров, апоптоз и т.д. Все митохондрии обладают собственным геномом, размер и структура которого может существенно варьировать от вида к виду. Тем не менее, кодирующая способность митохондриальной ДНК (мтДНК) ограниченна небольшим набором макромолекул, тогда как большинство белков импортируются из цитоплазмы. Кроме того, импорт некоторых малых РНК также необходим для обеспечения нормального функционирования митохондрий. Данный процесс весьма распространен; его удалось обнаружить у простейших, грибов, животных и растений.
В случае дрожжей Saccharomyces cerevisiae посредством ряда белковых факторов в митохондрии импортируется одна из лизиловых тРНК – тРНКLys(CUU). В нашей лаборатории было показано, что одним из факторов данного процесса является вторая изоформа гликолитического фермента енолазы (Eno2p). Этот белок, связываясь с импортируемой тРНК, изменяет ее конформацию, что является необходимым условием импорта.
Помимо этого, импортируемая дрожжевая тРНК, синтезируясь в клетках человека, также импортируется в митохондрии этих клеток. Молекулярные механизмы импорта тРНК в митохондрии дрожжей и человека, в соответствии с нашими данными, не отличаются друг от друга. Это позволяет предполагать, что человеческая енолаза участвует в «искусственном» импорте тРНК в митохондрии клеток человека.
Целью данной работы является установить, способна ли одна или несколько изоформ енолазы человека участвовать в импорте тРНКLys(CUU) в митохондрии дрожжей.
Для достижения поставленной цели были сформулированы следующие экспериментальные задачи:
1. Увеличится ли скорость роста клеток дрожжей, в которых ген ENO2 заменен на ген одной из трех различных изоформ енолазы человека, на среде с глицерином, по сравнению с клетками, в которых ген ENO2 делетирован?
2. Окажутся ли различными способности второй изоформы енолазы дрожжей и человеческих енолазы-1, енолазы-2 и енолазы-3 связывать тРЛ1?