Аннотация:Несмотря на то, что дрожжи Saccharomyces сerevisiae уже много лет используются в молекулярной биологии в качестве модельного объекта, остается еще очень много невыясненных вопросов относительно жизнедеятельности этих организмов. Одним из таких вопросов является митохондриальная трансляция.
Трансляция в митохондриях организована по прокариотическому принципу, но имеет некоторые особенности: митохондриальные рибосомы дрожжей имеют коэффициент седиментации 74S и состоят из двух субъединиц 54S и 37S; транслируется ограниченное число митохондриальных мРНК, которые требуют присутствия специальных белковых активаторов, закодированных в ядерном геноме. Что касается классических факторов трансляции, то mtIF1 отсутствует у всех живых организмов; mtIF2 близок к прокариотическому, но имеет вставку, компенсирующую отсутствие mtIF1; mtIF3 обнаружен лишь у некоторых организмов, включая дрожжи Schizosaccharomyces pombe. У дрожжей S.cerevisiae mtIF3 до настоящего времени не известен, но обнаружен митохондриальный белок Aim23p, детальный компьютерный анализ которого позволяет предположить, что он может выполнять функцию митохондриального IF3. Аминокислотные последовательности Aim23p и mtIF3 других организмов не имеют большого сходства, но обладают консервативными аминокислотами в функционально значимых участках и одинаковой доменной структурой.
Чтобы удостовериться, действительно ли Aim23p является фактором инициации трансляции, мы планируем заменить ген AIM23 S.cerevisiae на ген, кодирующий mtIF3 из S.pombe.
В начале работы необходимо проверить, вызывает ли делеция гена AIM23 остановку или дефекты клеточного дыхания у S.cerevisiae, что в случае дрожжей является однозначным указанием на нарушение митохондриальной функции. Митохондриальная функция оценивается по характеру роста на средах с несбраживаемыми источниками углерода.
Экспериментальные задачи:
- оценить скорость роста клеток S.cerevisiae с делетированным AIM23 на средах с несбраживаемыми источниками углерода.
- оценить скорость роста клеток S.cerevisiae, в которых ген AIM23 заменен на ген mtIF3 S.pombe, на средах с несбраживаемыми источниками углерода.