|
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
Интеллектуальная Система Тематического Исследования НАукометрических данных |
||
Сравнительный анализ состава ядрышко-подобных телец ооцитов и предшественников ядрышек ранних эмбрионов мышидипломная работа (Специалист)
- Научные руководители: Шишова Ксения Викторовна, Лаврентьева Елена Андреевна
- Автор: Джалилова Д.Ш.
- Тип: Специалист
- Организация, в которой проходила защита: МГУ имени М.В. Ломоносова
- Год защиты: 2015
- Аннотация: Отличительной особенностью предовуляторных GV ооцитов и ранних (зиготических) эмбрионов млекопитающих является отсутствие в них нормальных ядрышек. Вместо ядрышек в GV ооцитах присутствуют тельца, называемые «ядрышко-подобными тельцами, ЯПТ», а в зиготе – «предшественниками ядрышка, ПЯ». Принято считать, что по морфологии и функциональному состоянию ЯПТ и ПЯ являются сходными образованиями, которые по ряду признаков резко отличаются от ядрышек соматических клеток и растущих ооцитов, способных к биогенезу рибосом. Во-первых, в отличие от нормальных ядрышек, ЯПТ и ПЯ лишены характерных структурных ядрышковых субдоменов (фибриллярных центров, плотного фибриллярного компонента и гранулярного компонента) и образованы плотноупакованным фибриллярным материалом неизвестной природы. Во-вторых, активные рибосомные гены и ядрышковые белки удается локализовать только на поверхности ЯПТ и ПЯ, тогда как в нормальных ядрышках они отчетливо выявляются внутри ядрышек. Последнее обстоятельство не позволяет сделать вывод о белковом составе ЯПТ и ПЯ, тогда как протеом соматических ядрышек в разных типах клеток млекопитающих описан на сегодняшний день достаточно подробно. Ограниченное количество ооцитов и зигот, которое можно получить от животных (20-30 GV ооцитов и зигот от лабораторной мыши), не позволяет выделять ЯПТ и ПЯ в количествах, достаточных для их протеомного анализа. Расчеты показывают, что для проведения одного анализа даже наиболее чувствительным масс-спектрометрическим методом MALDI TOF (Matrix-assisted laser desorption/ionization Time-of-flight mass) требуется ручное выделение 500-1000 ЯПТ, что крайне тяжело сделать на ооцитах мышей и практически невозможно осуществить на ооцитах других видов млекопитающих. Поэтому до сих пор единственным подходом для изучения биохимического состава ЯПТ и ПЯ является иммуноцитохимия с использованием антител к белкам интереса. Однако даже этот подход нуждается в усовершенствовании, поскольку в условиях, стандартно применяемых для иммуноцитохимического изучения ооцитов и эмбрионов млекопитающих, основанных на их фиксации альдегидными фиксаторами, какие-либо белки внутри ЯПТ и ПЯ выявить не удается, так что вопрос о присутствии в этих тельцах ядрышковых белков остается открытым. Пилотные эксперименты, проведенные в нашей лаборатории, показали, что флуоресцентный белок-связывающий краситель флуоресцеин-5-изотиоцианат (ФИТЦ) может использоваться для выявления белков в ЯПТ ооцитов мыши. Однако возможность применения этого красителя для окраски зиготических эмбрионов, а также присутствие белков ядрышка в ЯПТ ооцитов и ПЯ зигот не были проанализированы. В связи с этим, основные задачи настоящей работы включали усовершенствование подходов для цито- и иммуноцитохимического выявления белков в ЯПТ ооцитов и ПЯ зигот млекопитающих (на примере мыши), а также сравнительный анализ их белкового состава.
- Добавил в систему: Лаврентьева Елена Андреевна