|
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
Интеллектуальная Система Тематического Исследования НАукометрических данных |
||
Клонирование, экспрессия в E.coli и характеристика NAD+-зависимой формиатдегидрогеназыдипломная работа (Специалист)
- Научные руководители: Алексеева Анастасия Александровна, Тишков Владимир Иванович
- Автор: Долина Ирина Александровна
- Тип: Специалист
- Организация, в которой проходила защита: МГУ имени М.В. Ломоносова
- Год защиты: 2015
- Аннотация: В нашей лаборатории проводятся систематические исследования ФДГ из различных источников, а работы последних лет посвящены изучению ферментов их высших растений, таких как соя Glycine max и Arabidopsis thaliana. В рамках проведения дальнейшего изучения растительных ФДГ было решено исследовать фермент из низшего растения – мха Physcomitrella patens. Известно, что мхи обладают высокой степенью устойчивости к различным изменениям окружающей среды, они способны адаптироваться к экстремальным режимам температуры, влажности и света. Поскольку формиатдегидрогеназа в растениях является универсальным ответом на различные виды стрессовых воздействий, изучение ФДГ мха представляет интерес с точки зрения фундаментальной науки. Таким образом, целью данной дипломной работы было клонирование кДНК гена ФДГ мха Physcomitrella patens, его экспрессия и изучение свойств. В ходе данной работы был проведен анализ баз данных, найден ген ФДГ мха Physcomitrella patens, обнаружено, что последовательность этого фермента обладает необычной структурой сигнального пептида, отвечающего за транспорт фермента в митохондрии. Была клонирована полноразмерная кДНК гена фермента, проведена экспрессия, очистка и изучение свойств. Показано, что значения кинетических параметров и каталитической константы полученного фермента хорошо согласуются с данными для других растительных ферментов. Далее были получены пять мутантных форм фермента с делециями N-конца, имитирующими отщепление сигнального пептида в природе. Проведена экспрессия всех мутантов, а также изучение свойств одного из них, полученного с наибольшим выходом по культивированию. Его кинетические параметры практически не изменились по сравнению с полноразмерным ферментом, в то время как термостабильность немного возросла. Таким образом, было проведено клонирование нового гена формиатдегидрогеназы из мха Physcomitrella patens, получен рекомбинантный фермент в активной и растворимой форме, а также изучены его свойства и проведено сравнение с изученными ранее ФДГ.
- Добавил в систему: Тишков Владимир Иванович