ИСТИНА

Малые белки теплового шока (sHsp) участвуют в ключевых процессах жизнедеятельности клеток, таких как апоптоз, пролиферация клеток, предотвращают накопление агрегатов денатурированных белков. Роль sHsp в функционировании живых систем требует их подробного изучения. При исследовании в условиях in vivo применяются химеры с флуоресцентными белками (FP). Модификация sHsp, обладающих малой молекулярной массой, флуоресцентным белком может исказить нативные свойства этих объектов, поэтому возникает необходимость предварительного изучения свойств изолированных химер. Были получены N- и C- концевые химеры, содержащие sHsp человека HspB1, HspB5, HspB6, HspB8. Исследовано олигомерное состояние химер и их шапероноподобная активность. Изучена способность С-концевых химер образовывать гетероолигомеры с белками дикого типа. С-концевые химерные белки экспрессируются, хуже, чем N-концевые, в клетках бактерий преимущественно содержатся в тельцах включения. Олигомеры химер HspB1 и HspB5, в норме образующих крупные комплексы, содержат меньше субъединиц, чем олигомеры белков дикого типа. Субъединичный состав изменяется в порядке sHsp WT > sHsp-FP > FP-sHsp. Поведение химер HspB6 и HspB8, в норме формирующих небольшие олигомеры, не отличается от белков дикого типа. Шапероноподобная активность С-концевых химерных белков ниже, чем у нативных белков. N-концевые химеры HspB1 и HspB8 обладают лучшей, а HspB5 и HspB6 худшей шапероноподобной активностью, чем немодифицированные sHsp. С-концевые химеры HspB1 и HspB5 эффективно образуют гетероолигомеры с соответствующими белками дикого типа, в случае химеры HspB6 формирование аналогичных гетероолигомерных комплексов затруднено. Расхождения в свойствах N- и С- концевых химерных белков отражает различия в функциях концевых доменов sHsp. N-концевой домен ответственен за формирование крупных олигомеров, при добавлении флуоресцентного белка к этому домену нарушается образование крупных комплексов. С-конец sHsp участвует в регуляции растворимости . Искажение свойств химер по сравнению с нативными белками ограничивает возможность их применения для изучения свойств sHsp. Работа выполнена при поддержке гранта РФФИ