ИСТИНА

Цель работы заключалась в оценке действия полисахарида из Helianthus tuberosus L. на жизнеспособность клеток макрофагов RAW 264.7 и их способность синтезировать TNF-α. Материалы и методы. Полисахарид был получен из лаборатории Polylab Pte Ltd. Полисахарид растворяли в полной культуральной среде DMEM. Клетки линии RAW 264.7 в количестве 106 высевают на 90-милиметровые чашки Петри и наращивают до 60–80% монослоя. Затем добавляют по 100 мкл 200 мкг/мл культурального раствора полисахарида и 0,9% раствора NaCl. Через 4 и 24 часа клетки промывают 0,1% PBS и заливают 250 мл смеси версен (0,02%): трипсин (0,25%). Через 10 минут инкубации в СО2-инкубаторе клетки пипетируют и осуществляют подсчет клеток ручным автоматическим цитометром Septer (Millipore). Учитывают клетки размером 15–22 мкм. Оценка влияния полисахарида на выработку TNF-α на макрофагальной клеточной линии RAW 264.7 проводилась методом иммуноферментного анализа с помощью набора TNF-α Elisa Ready-SET-Go!. Для детекции использовался 96-луночный планшетный ридер, длина волны – 450 нм. Определение TNF-α производили через 4 и 24 часа после введения исследуемого препарата. Были сформированы группы: Контроль (инкубация с физиологическим раствором); Опытная (с добавлением 100 мкг/мл HTLP), Положительный контроль (с добавлением LPS 10 нг/мл, в 0,9% NaCl). Результаты. Количество клеток на мл линии RAW 264.7 в контроле составило 355 800 ± 48 500, а в опытной группе – 310 700 ± 48 700. Таким образом, культивирование макрофагальных клеток линии RAW 264.7 с полисахаридом HTLP в концентрации 200 мкг/мл в течение 24 часов не приводило к достоверному увеличению процента мертвых или живых клеток в культурах клеток линии RAW 264.7. Было установлено влияние полисахарида на синтез TNF. Введение полисахарида в культуру клеток стимулирует выработку TNF-α, при этом уровень стимуляции примерно равен уровню стимуляции липополисахаридом, который в свою очередь статистически значимо отличается от контроля. Контрольные значения TNF-α в культуральной жидкости, через 4 часа – 3,18 ± 1,11 пкг/мл, через 24 часа – 16,21±7,06 пкг/мл. При этом для раствора полисахарида 100 мкг/мл – 83,13±7,34* и 129,5±11,87* пкг/мл, а для раствора LPS – 100,49±9,54* и 131,85±13,20* пкг/мл, соответственно. *-достоверное различие с контролем (критерий Манна-Уитни) (p<0,05). Выводы. Основной вывод заключается в том, что полисахарид является сильным индуктором TNF-α – до 8 раз в сравнении с контролем, при этом не является цитопатотическим агентом.