ИСТИНА

Новая формиадегидрогеназа (ФДГ, КФ 1.2.1.2) из термотолерантных дрожжей Ogatea paprapolymorpha клонирована в клетках E.coli. Для повышения стабильности фермента в клетках на N-конец аминокислотной последовательности был введен остаток Gly. Уровень экспрессии составил более 1 г целевого фермента с литра среды. Фермент был очищен до гомогенного состояния и его свойства были изучены. Оказалось, что кинетические параметры OpaFDH близки к таковым для растительных фермнтов (самые низкие значения Км). Термостабильность была изучена по кинетике инактивации и с помощью дифференциальной сканирующей калориметрии. Оказалось, что OpaFDH уступает по термостабильности только ферменту из бактерий Pseudomonas sp.101 и Staphylococcus aureus. Фермент был закристаллизован и была решена предварительная пространственная структура апо-формы фермента. Проведен анализ первичной и трехмерной структуры и были выбраны перспективные положения для увеличения температурной и химической стабильности. Проведен направленный мутагенез и получены мутантные ферменты. Работа выполнена при поддержке Российского Фонда Фундаментальных Исследований (РФФИ), грант 17-04-1662а