ИСТИНА

Целью работы является изучение каталитических свойств алкогольдегидрогеназы (АДГ) при ее взаимодействии с полиэлектролитами (ПЭ) в растворах с различной ионной силой. Данное исследование являет собой новый виток развития технологии создания полиэлектролитных микрокапсул (ПМК) с инкапсулированными ферментами, которые станут достойной заменой нативных ферментов, в клинико-биохимической диагностике и мониторинге биотехнологического производства. В рамках данной работы изучено влияние отрицательно заряженных полистиролсульфоната (ПСС) и декстрансульфата (ДС) и положительно заряженного полидиаллилдиметиламмония (ПДАДМА) на структуру и активность АДГ методами флуоресцентной и оптической спектроскопии. Нами показано, что ДС и ПДАДМА не влияют на структурные и каталитические свойства фермента. ПСС за 1 ч инкубации незначительно снижал величину собственной флуоресценции белка, что связано с частичным разрушением его четвертичной структуры (глобулярности). Изучение АДГ в свободном состоянии и в присутствии ПСС показало, что активность фермента зависела как от времени инкубации, так и от влияния ПСС. Также было обнаружено, что в присутствии ПСС фермент инактивировался значительно сильнее, чем свободный, при этом соотношение полиэлектролита к белку не влияло на активность. Ранее уже было показано, что моно- и дивалентные соли влияют на каталитические и структурные свойства комплекса лактатдегидрогеназы с ПСС, однако в нашем исследование продемонстрировано, что добавление в реакционную смесь хлорида натрия (2 М и 0.2 М) или сульфата аммония (0.1 М) не уменьшало разрушающего действия ПСС на четвертичную структуру белка, но в то же время частично снимало негативное влияние ПСС на активность отдельных субъединиц, за счет предотвращения образования дисульфидных мостиков между сульфогидрильными (‒SH) группами. Изученные взаимодействия ПЭ с АДГ имеют принципиальное значение для развития технологии конструирования полиэлектролитных ферментных микродиагнокстикумов. Полученные данные расширяют список капсулируемых белков и дают возможность глубже понять механизмы их взаимодействия с полимерами.