ИСТИНА

Нервно-паралитические отравляющие вещества (ОВ) представляют собой серьезную угрозу для здоровья и безопасности человека. К этому классу ОВ относят табун, зарин, зоман, циклозарин, O-этил-S-(2-диизопропиламиноэтил)метилтиофосфонат (Vx) и его аналоги. Среди всех вышеупомянутых ОВ наиболее активно использовали зарин. Нервно-паралитические ОВ быстро метаболизируются in vivo и частично присутствуют в форме свободного агента (в течение короткого времени после воздействия), частично – в форме продуктов разложения или метаболитов, а также образуют ковалентные аддукты с макромолекулами. Алкилметилфосфоновые кислоты – метаболиты зарина выводятся практически полностью с мочой в течение первых 24 часов после попадания в организм. Аддукты ОВ с макромолекулами обычно обнаруживают намного дольше, а, следовательно, вердикт о применении ОВ может быть вынесен значительно позже при расследовании инцидента. В крови человека ОВ наиболее часто связываются с альбумином, содержание которого очень велико. При этом фосфорилированию подвергаются остатки тирозина, которые могут быть отделены в процессе протеолиза, а полученные аддукты ОВ с этой аминокислотой – зарегистрированы с высокой чувствительностью методами масс-спектрометрии в сочетании с ВЭЖХ и МАЛДИ. В нашей работе был исследован процесс инкубации плазмы крови с зарином, с последующим расщеплением белковой фракции ферментами – проназой и трипсином. Показано, что применение процедуры FASP для трипсинолиза позволило добиться более полного расщепления исходной последовательности альбумина и зарегистрировать трипептидный маркер Y*TK, в котором Y* – отвечает фрагменту с остатком изопропилметилфосфоновой кислоты, присоединенным к фенольной OH-группе тирозина. Предложены условия ВЭЖХ разделения трипсинолизата плазмы крови человека, пригодные для обнаружения трипептида Y*TK. По данным МС высокого разрешения полностью охарактеризованы фрагментные ионы, образующиеся из молекулярного [Y*TK+H]+ иона. Показаны дополнительные пути фрагментации характерные для фосфорилированных пептидов. Таким образом, предложены наиболее характеристичные ионные переходы с m/z 531.2/214.1 и 531.2/489.2 для его определения и подтверждения, соответственно, которые могут быть использованы для определения этого аналита методом ВЭЖХ-МС МС детекторов низкого разрешения.