ИСТИНА

Один из приемов химеотерапии онкологических заболеваний направлен на индукцию образования микроядер (МЯ) в опухолевых клетках. МЯ возникают как при разрывах ДНК, так и при нарушении организации веретена деления. В первом случае формируются одно-два небольших МЯ, во-втором – множество более крупных МЯ, число которых может совпадать с числом хромосом. Если опухолевые клетки содержат нормальный ген белка р53, то в них происходит остановка клеточного цикла и запускается апоптотическая гибель. Однако если опухолевая клетка обладает способностью элиминировать МЯ, она может избежать гибели, и химеотерапия не будет успешной. Целью нашей работы являлось исследование возможности элиминации МЯ в клетках культуры карциномы молочной железы MCF-7. Для индукции образования МЯ на клетки воздействовали 125 нМ паклитаксела (ПТ) в течении 48 ч с последующим удалением агента (24 ч). ПТ является химеотерапевтическим препаратом, вызывающим стабилизацию микротрубочек, что приводит к накоплению К-митозов с последующим формированием МЯ (13±4 % через 24 ч, 27±5 % через 48 ч, 24±2% 24 ч после удаления агента). Т.к. данная культура клеток содержит нормальный ген белка р53, в дальнейшем клетки с МЯ подвергаются апоптотической гибели. Апоптотический индекс составляет 8,58± 0,69% через 48 ч воздействия ПТ и 8,23±1,16% 24 ч после удаления агента. Морфологический анализ выявил образование двух типов МЯ: многочисленных крупных и одиночных мелких. МЯ первого типа образовались в результате нарушения формирования веретена деления. Часть таких МЯ является «вакуолизированными». Доля клеток с «вакуолизированными» МЯ составляет 25±5 % через 48 ч воздействия ПТ; через 24 ч после удаления агента их доля возрастает до 48±4%. Окрашивание моноданзил кадаверином и LysoTracer DND-99 показало, что несмотря на вакуолизацию, эти микроядра не подвергаются аутофагической и лизосомной деградации. Электронно-микроскопическое исследование показало, что в таких микроядрах происходит набухание перинуклеарного пространства. Второй тип МЯ, выявленных в культуре MCF-7, представлен одиночными мелкими структурами. Можно предположить, что эти микроядра формируются в результате двойных разрывов ДНК. Такие микроядра могут элиминироваться с помощью лизосомной деградации или с помощью экструзии из клетки путём образование блебсов. Анализ распределения белка р53 в микроядрах при действии ПТ показал, что данный белок может присутствовать как во всех микроядрах, так и только в некоторых (независимо от размера и «вакуолизации»). Это означает, что р53-опросредованная индукция остановки клеточного цикла и апоптотическая гибель клеток при действии ПТ не связана с особенностями морфологии МЯ. Таким образом, воздействие ПТ на клетки культуры MCF-7 индуцирует возникновение двух групп МЯ, вероятно различных по биогенезу и способу элиминации. Наши данные показывают, что клетки культуры MCF-7 могут элиминировать одиночные МЯ. Это в свою очередь может служить защитным механизм от р53-опосредованного апоптоза. Однако в случае образования большого числа МЯ, которые могут быть элиминированы путем «вакуолизации», индуцируется р53-опосредованная гибель опухолевых клеток.