ИСТИНА

Актуальность. В России на гемобластозы приходится приблизительно 4,5% в структуре всех онкологических заболеваний и до 6% в структуре смертности от них. На 2023 г. заболеваемость составляла 16000 случаев на 100 000 населения. Лимфобластные лейкозы, вызванные Т-клетками, поддаются полихимиотерапии. Однако, тестирование новых соединений необходимо, поскольку количество селективных препаратов для лечения Т-клеточных заболеваний несколько ограничен. Соответственно, синтез и разработка новых эффективных соединений является необходимостью Ярким примером служит, берберин - известное природное соединение, которое содержится в некоторых лекарственных растениях. Берберин проявляет множество биологических активностей: антиоксидантную, противовоспалительную, снижает уровень холестерина и глюкозы в крови. Берберин ингибирует пролиферацию клеток, через циклинзависимые киназы останавливая клеточный цикл, модулирует воспаление и индуцирует апоптоз. Снижая экспрессию белков, берберин также предотвращает инвазию опухолевых клеток и метастазирование. Цель. Изучение цитостатической и специфической реакции берберина и 15 го синтетических производных на клетках лимфобластного лейкоза Jurkat и лимфоцитах здоровых доноров. Материалы и методы. Синтез, очистку берберина и новых производных на его основе, осуществляли сотрудники кафедры природных и высокомолекулярных соединений химического факультета «Южного федерального университета». Для наших экспериментов нам были предоставлены берберин и 15 его синтетических производных. На 1 этапе мы наращивали клеточную линию Т-лимфобластного лейкоза Jurkat, а также из крови здоровых доноров выделяли мононуклеары на градиенте плотности фиколла. Затем клетки пассировали в 96 луночные планшеты, вносили берберин и его производные в серии двукратных разведений для построения кривой доза-ответ и определения половинной ингибирующей концентрации. Клетки культивировали в СО2 инкубаторе в течение 72 часов. На последнем этапе проводили окрашивание ядерными красителями Хегстом и бромистым этидием. Полученные электронные изображения обрабатывали при помощи программного обеспечения имиджера LionHearttm. Это позволило нам определить половинную ингибирующую концентрацию и соотношение живых/мертвых клеток. Опыт проводили трижды. Результаты Нами был протестирован берберин и 15 его синтетических производных. В некоторых случаях не было получено кривых доза-ответ, так как цитостатическое действие не наблюдалось даже при максимальной возможной концентрации соединения. В отношении клеточной линии Jurkat высокую активность (когда половинная ингибирующая доза была ниже 1000 микромоль) показали соединения МАГ-1, МАГ-2, 21А, ZbRNN, Rub, 12NO2, EPOX и NAPh. Для остальных соединений значение IC50 было выше 1000 микромоль или не определялось. Следующим шагом нашего эксперимента стало определение специфичности данных соединений. Лимфоциты здоровых доноров инкубировали в 96 луночных планшетах с изучаемыми соединениями 72 часа. после окраски ядер определяли процент мертвых клеток. Соединения Rub и ZbRnn, 12NO2 не обладали токсичностью по отношению к лимфоцитам, при этом токсическое действие на клетки Jurkat было отчетливо выражено. Соединения 21А не оказалo токсического действия ни на лимфоциты, ни на клетки опухоли. Таким образом, все соединения показали высокую специфичность, как и оригинальное соединение. Исследуемый параметр доли мертвых клеток был достоверен. Исключение составило соединение 21А, которое не влияло на количество мертвых клеток, а полученное низкое значение IC50 мы объясняем вероятным действием за счет остановки цикла пролиферации, а не стимуляцией гибели клеток. Вывод. Наибольший интерес для дальнейшего изучения специфичности, определения механизмов действия представляют соединения МАГ-1, МАГ-2 и, а также ZbRNN, Rub, 12NO2, 21А для которых выявлена высокая активность в сочетании со специфичным действием в отношении опухолевых клеток. Исследование выполнено при финансовой поддержке государственного задания «Поиск натуральных и синтетических вторичных метаболитов растений, обладающих противоопухолевыми и иммунокорригирующими свойствами на моделях in vitro и in vivo», номер регистрации 124022100044-2 от 2024 г.