ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
|
Интеллектуальная Система Тематического Исследования НАукометрических данных |
||
Tenebrio molitor и Tribolium castaneum являются жуками-вредителями зерновых запасов. Главными пищевыми белками этих насекомых являются проламины – глутамин- и пролин-богатые запасные белки семян злаковых растений. Эти белки являются также важными компонентами пищи человека. В состав проламинов входят не гидролизуемые человеческими пептидазами глутамин- и пролинбогатые пептиды, вызывающие аутоиммунное заболевание целиакию у чувствительных людей. Лекарства от целиакии нет, и больным предлагается полный отказ от продуктов, содержащих проламины пшеницы, ржи и ячменя. Ранее было показано, что комплекс пищеварительных пептидаз тенебрионид существенно отличается от человеческого. Мы предположили, что в состав комплекса насекомых могут входить глутамин- и пролинспецифичные пептидазы, способные гидролизовать трудногидролизуемые пептиды проламинов и пригодные для лечения целиакии. Поиск с использованием специфических хромогенных субстратов позволил выявить соответствующие протеолитические активности в кишечниках личинок этих насекомых. Оказалось, что глутаминспецифичная активность принадлежит цистеиновым катепсинам L и В из семейства С1. Пролинспецифичной активностью обладают пищеварительные дипептидилпептидаза IV, пролилкарбоксипептидаза и предположительно пролидаза, а также не пищеварительный тканевый фермент пролилолигопептидаза. Наиболее высокоэкспрессируемые катепсины L и В из кишечников личинок были выделены, очищены, идентифицированы с использованием масс-спектрометрических методов и охарактеризованы. Подробно изучена субстратная специфичность с использованием предложенных в лаборатории субстратов. Подробно охарактеризованы очищенные препараты пролинспецифичных пептидаз из личинок T. molitor. кДНК пролилкарбоксипептидазы клонирована и определена первичная структура этого фермента. Показано участие глутамин- и пролинспецифичных пептидаз в гидролизе проламинов пшеницы глиадинов. На основании полученных данных предложена гипотетическая схема полного гидролиза глутамин- и пролинбогатых фрагментов глиадинов специфичными пищеварительными пептидазами из личинок T. molitor и подтверждена экспериментально ее первая стадия. Работа поддержана грантами РФФИ 12-04-01562-a, 12-03-01057-a и 12-04-31451-мол-а.