ИСТИНА

В лимфоцитах фосфатаза CD45 контролирует уровень фосфорилирования ряда рецепторов и сигнальных молекул и таким образом является важным регулятором активации иммунокомпетентных клеток. Однако какие молекулы управляют активностью самой CD45, остается невыясненным. На роль регулятора претендует лимфоцитарный фосфатаза-ассоциированный фосфопротеин (LPAP). Этот небольшой трансмембранный белок образует надмолекулярный комплекс с CD45, а также с корецептором CD4 и киназой Lck. В самых последних работах было показано, что белок LPAP может влиять на пролиферацию и выживаемость В-лимфоцитов (Kleiman et al., 2015). Также было обнаружено, что белок LPAP кооперирует с продуктом гена c-myc в процессе злокачественной трансформации пре-В-клеток (Wolf et al., 2016). Все это указывает на важную роль белка LPAP в регуляции кле-точных процессов. Мы предполагаем, что функция белка LPAP может быть раскрыта путем изучения фосфорилирования этой молекулы. Используя направленный мутагенез и масс-спектрометрический анализ, нами были идентифицированы сайты фосфорилирования LPAP. Информация о фосфо-мотивах белка LPAP была использована для синтеза соответствующих фосфопептидов и получения на их основе антител против обнаруженных фосфо-сайтов. Полученные фосфо-специфические антитела подтвердили идентифицированные нами сайты фосфорилирования и позволили изучить кинетику фосфорилирования/дефосфорилировании LPAP в ответ на физиологические стимулы. Нами было обнаружено, что при активации лимфоцитов под действием антитела ОКТ3, направленного против антиген-специфического рецептора TCR, происходит быстрое дефосфорилирование Ser-99 и Ser-172, вслед за которым наблюдалось более медленное фосфорилирование Ser-163. Фосфорилирование Ser-153 оставалось неизменным и не зависело от внешних стимулов. Воздействие форболмиристата, который является активатором протеин киназы С, приводило к аналогичной цепочке событий. Нокаут киназы Lck отменял действие антитела ОКТ3, но не форболмиристата. Было проведено сравнение изменений статуса фосфорилирования LPAP с кинетикой активации различных киназ. Эти эксперименты вместе с ингибиторным анализом указали на возможные киназы, которые находятся в сигнальных путях upstream и downstream от белка LPAP. Анализ мотивов белка LPAP показал, что казеин киназы типа I и II, а также MAP киназы могут принимать участие в фосфорилировании белка LPAP. Полученные данные позволяют перейти к изучению роли белка LPAP при конкретных аутоиммунных и онкологических заболеваниях.