ИСТИНА

Эховирусы и вирусы Коксаки имеют (+)РНК-геном и вызывают различные заболевания человека [1]. Как и другие пикорнавирусы, они используют внутренние сайты посадки рибосом (IRES) для кэп-независимой инициации трансляции своих РНК [2], однако молекулярные механизмы их работы изучены недостаточно. Чтобы найти гены человека, вовлеченные в жизненный цикл эховирусов, мы провели полногеномный нокаутный CRISPR/Cas-опосредованный скрининг устойчивости культивируемых клеток HEK293T к цитопатической инфекции, вызываемой вирусами Echo6 и Echo11. Мы идентифицировали ген MBNL1 (Muscleblind Like Splicing Regulator 1), который кодирует РНК-связывающий белок, участвующий в альтернативном сплайсинге мРНК, как необходимый для продуктивной инфекции. Белок MBNL1 является партнером другого регулятора сплайсинга, PTBP1 [3], который хорошо известен как ITAF – клеточный транс-действующий фактор, необходимый для активности IRES-элементов ряда пикорнавирусов [2]. Мы предположили, что MBNL1 также является ITAF, участвующим в трансляции, опосредованной IRES-элементами данных вирусов. Мы создали моноклональные клеточные линии HEK293T и RD1, нокаутные по гену MBNL1 (KO), и инфицировали их различными энтеровирусами. Эховирусы Echo6, Echo7, Echo14, Echo19 и Echo30, а также вирусы Коксаки A CVA16 и CVA9 показали 3-4-дневную задержку в гибели нокаутных клеток по сравнению с клетками дикого типа, а CVA9 вообще не оказывал цитопатического эффекта на клетки с нокаутом MBNL1. Напротив, вирусы Коксаки B CVB3, CVB4 и CVB5, а также полиовирусы PV1, PV и PV3 не нуждались в MBNL1 для проявления цитопатического эффекта. Значимость MBNL1 для трансляции, опосредованной IRES-элементами энтеровирусов CVA9, CVB3, Echo6 и Echo11, была затем исследована с помощью репортерных конструкций в клетках, трансфицированных мРНК, а также в бесклеточной системе трансляции на основе лизатов нокаутных клеток. Обсуждаются перспективы структурного исследования комплекса MBNL1 с IRES-элементами эховирусов. Исследование поддержано Российским научным фондом (грант № 23-14-00218). Литература 1. Lee H., Chen C., Huang Y. et al. Clinical features of echovirus 6 and 9 infections in children // J. Clin. Virol., 2010, 49, 175-179. 2. Sorokin I.I., Vassilenko K.S., Terenin I.M. et al. Non-Canonical Translation Initiation Mechanisms Employed by Eukaryotic Viral mRNAs // Biochemistry (Moscow), 2021, 86, 1060-1094. 3. Gooding C., Edge C., Lorenz M. et al. MBNL1 and PTB cooperate to repress splicing of Tpm1 exon 3 // Nucleic Acids Res., 2013, 41, 4765–4782.