ИСТИНА

В настоящее время антибиотикорезистентные штаммы и связанные с ними инфекции представляют собой глобальную проблему. Число устойчивых штаммов растёт, и в будущем устойчивые инфекции, как ожидается, будут вызывать больше смертей, чем онкологические заболевания и заболевания сердечно-сосудистой системы. Для исследования бактериальных штаммов на резистентность в настоящий момент наиболее широко используются методы микроразведений, дискодиффузионный метод, Е-тесты и т.д. Эти методы основаны на том, что антибиотик препятствует росту бактерий, устойчивые же штаммы беспрепятственно растут. Таким образом, время, которое необходимо затратить для проведения теста, определяется тем, как быстро растет культура бактериальных клеток. К примеру, для E.coli или K.pneumoniae эти методы в среднем занимают 18-36ч, тогда как для медленнорастущих Mycobacterium tuberculosis тест на резистентность занимает 6-8 недель. Также существуют быстрые методы определения антибиотикорезистентности, основанные на ПЦР (к примеру тест система GeneXpert MTB/RIF), однако одна тест система чаще всего применима только к одному конкретному антибиотику. Нами был разработан быстрый метод определения антибиотикорезистентности на основе МТТ – теста. МТТ – тест используется для определения уровня метаболизма бактерий, который резко снижается при ингибировании роста клеток антибиотиком. Образующийся в ходе внутриклеточного восстановления формазан детектируется спектроскопией комбинационного рассеяния (Раман-спектроскопией). Применение Рамановской спектроскопии позволяет определять формазан с гораздо большей чувствительностью и специфичностью по сравнению с используемой в классическом МТТ-тесте спектрофотометрией. Время анализа составляет 1-2 часа. Также нами была предложена модификация метода, включающая сверхчувствительное определение формазана спектроскопией гигантского комбинационного рассеяния (ГКР). Для ГКР спектроскопии использовались ГКР-активные фильтрующие мембраны с Ag/Cr наночастицами. Применение эффекта ГКР позволило повысить чувствительность вплоть до детекции отдельных клеток.