ИСТИНА

Фермент простагландин-H-синтаза (PGHS; К.Ф.1.14.99.1) осуществляет синтез простагландинов из арахидоновой кислоты. Простагландины являются медиаторами, ответственными за важные физиологические процессы: свёртывание крови, репродуктивные функции, работа желудочно-кишечного тракта, реакции иммунного ответа и др. PGHS катализирует две последовательные реакции: циклооксигеназную, в ходе которой арахидоновая кислота окисляется двумя молекулами кислорода и превращается в простагландин G2 (PGG2), и пероксидазную, в результате которой PGG2 преобразуется в PGH2 в присутствии донора электронов. В ходе обеих реакций фермент подвергается необратимой инактивации. Катализ обеих реакций способна проводить только холоформа PGHS (комплекс белка с кофактором гемом). В предыдущих работах определяли только равновесную константу диссоциации комплекса, причём оценивали её значение только косвенным путём, поэтому эти значения расходились на 1-2 порядка. Индивидуальные константы скорости реакций процесса комплексообразования не определялись. В настоящем исследовании кинетику ассоциации и диссоциации холоформы PGHS изучали с использованием апоформы фермента, полученной методом восстановления гемового железа дитионитом натрия в анаэробных условиях и дальнейшего окисления системы кислородом. Концентрацию холоформы PGHS детектировали по скорости циклооксигеназной реакции в различных условиях. Для простейшей модели найдены значения константы скорости присоединения гема к апоферменту (3*10^5 М^(-1)*сек^(-1)) и константы скорости отщепления гема от холофермента (3,9*10^(-3) сек^(-1)). Соответственно, равновесная константа диссоциации составляет 1,3*10^(-8) М при 25°C.