ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
|
Интеллектуальная Система Тематического Исследования НАукометрических данных |
||
Стрептококк и стафилококк являются наиболее опасными из всех грамположительных микроорганизмов. Например, стрептококк групп А и С вызывает такие заболевания, как ангина, импетиго, рожа, скарлатина, ревматизм, нефриты, эндокардиты. 25% штаммов стрептококка группы А устойчивы к пенициллину. В России ежегодно болезни стрептококковой этиологии поражают 3 - 5 млн. человек, 10% случаев имеют ле-тальный исход. Золотистый стафилококк способствует возникновению фурункулов, ячменей, пневмоний, менингитов, эндокардитов, нагноений и инфекций по типу заражения крови. 90% штаммов золотистого стафилококка обладает множественной резистентностью к антибиотикам. Среди пациентов, зараженных Staphylococcus aureus, смертность составляет 30%, в России болезни стафилококковой этиологии ежегодно поражают более 100.000 человек. Литические ферменты бактериофагов являются альтернативой антибиотикотерапии. Такие ферменты образуются на конечных стадиях инфицирования бактериальных клеток фаговыми частицами. Они способны разрушать клеточную стенку бактерий, что делает их перспективными антимикробными агентами. В 2005 году был выделен фермент, продуцируемый бактериофагом К при заражении им клеток Staphylococcus aureus. В литературе он встречается под именем LysK. Данный фермент способен лизировать клетки более 20 штаммов Staphylococcus aureus, в том числе резистентных к метициллину. В середине 70-х годов сотрудниками Рокфеллерского Университета Нью-Йорка (США) был обнаружен фермент, лизирующий клетки стрептококка групп А и С. Данный фермент является фаг-ассоциированным и продуцируется после заражения бактериальной клетки бактериофагом С1. Этот фермент осуществляет гидролиз амидной связи между L-аланином и N-ацетилмурамовой кислотой пептидогликанового остова клеточной стенки стрептококка. В литературе он встречается по именем PlyC. Основным недостатком данных ферментов, препятствующим их применению в качестве антибактериальных агентов, является их низкая стабильность при физиологической температуре (37°С) и при температуре хранения (25°С, комнатная температура). Кроме того, эти ферменты как биокатализаторы практически не изучены. В связи с этим одной из задач исследования было получение основных характеристик ферментов, знание которых важно для подбора стабилизирующих агентов. Во – первых, это уточнение молекулярной массы, олигомерной организации и субстратной специфичности полученных ферментов. Во - вторых, дискриминация механизмов инактивации. В третьих, идентификация групп, входящих в состав реакционных центров. Подбор стабилизирующих агентов осуществлялся с учетом следующих требований: эффектор должен увеличивать сродство фермента к субстрату, быть нетоксичным и биоразлагаемым, метод модификации должен быть прост и дешев, фермент в препарате должен сохранять активность в течение 0.5 – 1 года при +25°С (температура хранения). В экспериментах было показано, что оба фермента содержат в своих реакционных центрах цистеин и гистидин, причем окисление цистеина не является лимитирующей стадией процесса инактивации. Установлено, что молекула LysK состоит из одной субъединицы, основная причина его инактивации – агрегация макромолекул. Обнаружено, что PlyC – олигомерный фермент, инактивирующийся по диссоциативному механизму. В экспериментах по стабилизации были использованы следующие подходы: наложение внутримолекулярных химических сшивок; включение в композиции, содержащие нетоксичные низкомолекулярные добавки и полиэлектролиты; химическая иммобилизация на полимерных носителях. Причины наблюдаемых эффектов обсуждаются.