ИСТИНА

Одной из актуальных задач современной аналитической химии является создание чувствительных и селективных способов определения пероксидов различного строения в объектах на основе матриц сложного состава, в том числе водонерастворимых. Для мониторинга и определения пероксидов предлагается большое число различных методик, среди которых важное место занимают различные сенсоры, в том числе твердофазные, основанные на формировании и измерении аналитического сигнала вне раствора, непосредственно в чувствительном слое, закрепленном на поверхности подложки. Ранее [1] для определения пероксидов различного строения нами был разработан твердофазный спектрофотометрический биосенсор на основе оптически прозрачных пленок {хитозан-пероксидаза}, закрепленных на поверхности стекла. Действие сенсора основано на пероксидазном окислении фенольного соединения и взаимодействии продуктов окисления с хитозаном с образованием окрашенного продукта (λabs = 350 нм). Разработанный сенсор позволяет определять перечисленные соединения на мкМ – мМ уровне концентраций, что сопоставимо или незначительно превосходит описанные в литературе аналоги. Один из подходов к увеличению чувствительности определения в рассматриваемой индикаторной системе заключается в проведении реакции в водно-органической среде (при малых содержаниях органического растворителя). Целью настоящей работы являлось изучение кинетики ферментативного окисления фенольных соединений (на примере пирокатехина) пероксидами различного строения (пероксидом водорода, пероксидом мочевины, 2-бутанонпероксидом, бензоилпероксидом и трет-бутилгидропероксидом) в водной и водно-органической среде (содержащей 10 – 50 об. % этилового спирта, ацетонитрила или ДМСО) при условиях, оптимальных для работы твердофазного оптического биосенсора. Полученные кинетические кривые линеаризованы в рамках методов Лайнуивера – Берка, Хейнса и Иди – Хофсти, рассчитаны значения кинетических параметров реакции. Показано, что эффективность окисления увеличивается в ряду аналитов: трет-бутилгидропероксид < 2-бутанонпероксид < пероксид водорода < пероксид мочевины, а направленный выбор полярности растворителя в зависимости от природы пероксида позволяет регулировать эффективность превращения перечисленных субстратов пероксидазы.