ИСТИНА

На сегодняшний день наибольшее распространение получили векторы на основе РНК-содержащих вирусов растений. В этом случае для генноинженерных манипуляций используется кДНК-копия генома с последующей транскрипцией in vitro (механическая инокуляция листьев) или in planta под контролем растительного промотора (агроинфильтрация). Подобные векторы применяют для индукции направленной РНК-интерференции, редактирования генома за счет экспрессии гидовых РНК, накопления химерных вирусных частиц, а также синтеза различных белков медицинского назначения, в том числе тяжелых и легких цепей антител. Основная стратегия создания вектора подразумевает дупликацию одного из вирусных субгеномных промоторов, чаще всего гена белка оболочки (БО). Как правило, вставка чужеродной последовательности между повторяющимися участками генома приводит к ее потере за счет РНК-рекомбинации, поэтому для системной экспрессии трансгена используют гетерологичные промоторы из вирусов, принадлежащих к одной таксономической группе. Вектор может быть «деконструирован» с получением «константного» и вариабельного модулей и собран в растении с помощью сайт-специфической рекомбинации или транс-сплайсинга. Генетическая модификация экспонированных снаружи вириона N- и/или С-концевых областей БО открывает возможность сборки в растениях химерных частиц, содержащих на поверхности целевые пептиды. В качестве примера можно привести созданную в нашей лаборатории противогриппозную нановакцину широкого спектра действия. Спиральные частицы вируса табачной мозаики (4г/кг свежих листьев), включающие консервативный М2е-антиген (23 а.о.) вируса гриппа А, обеспечивали защиту иммунизированных мышей от 5 летальных доз различных штаммов вируса гриппа А. Добавление в последовательность БО дополнительных остатков лизина позволяет проводить химическую реакцию биоконъюгации полученных вирионов c любыми белками, имеющими молекулярную массу в пределах 20 – 70 кДа.