ИСТИНА

Повышенная экспрессия рецептора HER2/neu характерна для некоторых типов раковых клеток человека [1]. Белок DARPin 9_29, являющийся одним из представителей миметиков антител, созданных на основе модифицированных анкириновых повторов, специфически связывается с внеклеточным доменом HER2/neu[2]. В настоящей работе была получена гибридная конструкция, нацеленная на сверхэкспрессирующие HER2/neu опухоли, на основе белков DARPin 9_29 и ферритина, Последний при физиологических условиях образует 24-мерный сферический комплекс, который разбирается при изменении pH или использовании денатурирующих агентов и восстанавливается при возвращении исходных условий [3]. Данную особенность планируется использовать для нагрузки низкомолекуярными противоопухолевыми агентами. В данной работе была использована легкая цепь человеческого ферритина (Ferritin light chain, FTL). При помощи методов генной инженерии из клеток K-562 была поднят ген FTL и встроен в бактериальный вектор рЕТ-24. Также в данный вектор была встроена последовательность, несущая в одной рамке считывания гены DARPin 9_2 и FTL. Обе генетические конструкции содержали шестигистидиновую последовательность перед геном FTL (His-Tag–FTL и DARPin9_29–His-Tag–FTL) для последующего выделения целевых белков на Ni-NTA агарозе. Их наработку осуществляли в бактериальной культуре E.coli штамма Rosetta. После выделения проводили мечение белков красителем AlexaFluor488 и их тестирование на клетках SK-BR-3, с повышенной экспрессией рецептора HER2/neu, и HeLa, не обладающей экспрессией данного рецептора. По результатам конфокальной микроскопии конструкция DARPin9_2–His-Tag–FTL связывалась с клетками SK-BR-3, тогда как ее взаимодействия с клетками HeLa не наблюдалось. Конструкция His-Tag–FTL с клетками SK-BR-3 и HeLa не связывалась. При помощи метода динамического светорассеяния было показано, что данная конструкция собирается в сферу. Таким образом, в данной работе была получена новая адресная конструкция для доставки лекарств к раковым клеткам, сверхэкспрессирующим рецептор HER2/neu.