ИСТИНА

Появление у опухолевых клеток способности к метастазированию, как правило, ассоциировано с неблагоприятным прогнозом для пациента. Молекулярные механизмы, приводящие к изменению метастатического потенциала клеток активно исследуются на протяжении нескольких десятилетий. Установлено, что в данном процессе активно принимают участие молекулы, взаимодействующие с внеклеточным матриксом или с молекулами клеточной адгезии. Природный MUC1 представляет собой гетеродимер, в котором экстрацеллюлярная N-концевая субъединица, содержащая область тандемных повторов (VNTR), ассоциирована с С-концевой субъединицей, содержащей трансмембранный (TM) и цитоплазматический (CT) домены. Предположения о роли муцина MUC1 в процессе метастазирования высказывались с тех пор, как было установлено, что при злокачественной трансформации клетки данный гликопротеид теряет свою апикальную локализацию и приобретает периферическую. Однако непосредственное влияние области VNTR муцина MUC1 на способность опухолевых клеток к метастазированию остается не выясненным. Методами генетической инженерии на основе экспрессионного вектора pEGFP-N3 были получены конструкции, кодирующие различные комбинации функциональных фрагментов муцина MUC1, содержащие и не содержащие область VNTR, а также маркеры для идентификации синтезируемых химерных белков (FLAG-эпитоп и EGFP). Для создания клеточных моделей использовались культивируемые клетки линии HT-29 с низким уровнем экспрессии эндогенного муцина MUC1, которые были транзиентно трансфецированы полученными конструкциями. Экспрессию химерных белков идентифицировали по флуоресценции EGFP, благодаря чему нам удалось предварительно оценить различия в локализации исследуемых слитых белков в зависимости от наличия в их составе различных функциональных фрагментов муцина MUC1 человека. В результате работы нами были созданы клеточные модели для исследования влияния области VNTR муцина MUC1 на способность опухолевых клеток к метастазированию. В дальнейшем полученные модели могут быть использованы для оценки подвижности опухолевых клеток in vitro, что принято считать критерием их метастатического потенциала.