ИСТИНА

Мембранные ферменты играют важную роль в живых организмах, и изучение их свойств необходимо для детального понимания путей метаболизма, механизмов регуляции и других аспектов жизни. Однако исследования мембранных ферментов затруднено ввиду нерастворимости многих из них в воде и отсутствия эффективных методов определения их активности. Одним из таких ферментов является галактонолактоноксидаза из микроорганизма-паразита Trypanosoma cruzi (TcGAL), вызывающего болезнь Шагаса. TcGAL катализирует финальную стадию синтеза витамина С – антиоксиданта, который T.cruzi не может потребить извне и вынужден синтезировать самостоятельно, поэтому TcGAL рассматривается как потенциальная лекарственная мишень. В настоящей работе предложен подход с использованием системы обращённых мицелл ПАВ (анионный АОТ) в н-октане – эффективный метод, позволяющий получить TcGAL в нативной форме и измерить его каталитическую активность. Возможно использование и других ПАВ, таких как катионный ЦТАБ и нейтрально заряженный Бридж-96. Отметим, что обращённые мицеллы являются релевантными моделями мембран. Обнаружено функционирование TcGAL в виде мономерной и димерной форм в мицеллярной среде. Показано, что использование мицелл АОТ позволяет не только измерять активность TcGAL, но и изучать его ингибирование, например, аллилполиалкоксибензолами (АПАБ), обладающими низкими IC50 (10-100 мкМ). С использованием мицеллярного подхода установлен конкурентный механизм ингибирования TcGAL апиолом и выявлена роль аллилльного и бензодиоксольного фрагментов у АПАБ, что позволяет проводить более целенаправленный поиск ингибиторов TcGAL.