ИСТИНА

Фитостероиды – класс растительных стероидов, включающий, в частности экдистероиды – производные экдизона (около 300 соединений с различным числом углеродных атомов в боковых радикалах и разными заместителями). Эти вещества обладают иммуностимулирующим и антимикробным действием, поэтому важно их индивидуальное и групповое определение в растительном сырье. Оптимальный метод детектирования таких соединений – ВЭЖХ-МС, однако из-за низкого содержания данных веществ в анализируемых объектах необходимо концентрирование и отделение матрицы. Повышение селективности определения аналитов и их групповое концентрирование может быть достигнуто при использовании метода молекулярного импринтинга. При этом в качестве темплата может быть выбран всего один представитель класса фитостероидов. В данной работе предложены и реализованы методики создания сорбентов на основе кремнезема с привитым белком (БСА) с молекулярными отпечатками экдистена, одного из представителей класса фитостероидов. Содержание экдистена в растворах при изучении сорбции определяли методом обращеннофазовой ВЭЖХ-МС. За основу для получения сорбентов был взят кремнезем «Диасорб-ИДК-250» (100–200 мкм) с привитыми группами иминодиуксусной кислоты. Ковалентную пришивку белка проводили в среде ДМСО при использовании N-гидроксисукцинимида и N-(3-диметиламинопропил)-N′-этилкарбодиимида. Предварительно в раствор белка добавляли темплат (экдистен) для получения его комплекса с белком. Для нековалентнго закрепления белка поверхность SiO2-ИДК сначала модифицировали полиаллиламином (ПААГХ), затем слоем белка и затем снова ПААГХ. Экдистен в качестве темплата вводили в раствор и белка, и ПААГХ. Получали сорбенты на основе нативного и денатурированного БСА (после восстановления дисульфидных связей с последующим метилированием по сере). Показали, что разрушение дисульфидных мостиков в структуре БСА не влияет на сорбционные свойства получаемых сорбентов. Сорбенты, получаемые путем нековалентного закрепления белка, сильнее сорбируют экдистен, чем при использовании ковалентной пришивки белка к поверхности SiO2. Образцы импринтированных сорбентов удерживают большее количество экдистена по сравнению с аналогичными сорбентами без молекулярных отпечатков (при их синтезе экдистен к белку/ПААГХ не добавляли), причем отличие в сорбции заметнее при использовании нековалентного закрепления белка на кремнеземе. Авторы благодарят РФФИ за финансовую поддержку (проект № 13-03-00441-а).