ИСТИНА

Патогенез ХМЛ обусловлен активностью химерной тирозинкиназы Bcr-Abl. Селективные ингибиторы Bcr-Abl (прототип – иматиниб) вызывают терапевтический эффект при лечении первичного процесса. Однако впоследствии часто развивается устойчивость, обусловленная, в частности адаптивными изменениями транскрипции генов и активацией механизмов выживания в опухолевых клетках. Перепрограммирование транскрипции опосредует циклинзависимая протеинкиназа CDK8 (или ее паралог CDK19) в комплексах с циклином С и компонентами Mediator. Ингибирование CDK8 / 19-опосредованного перепрограммирования транскрипции направлено на предотвращение защиты клеток ХМЛ от действия ингибиторов Bcr-Abl. Цель исследования – изучить возможность повышения чувствительности клеток ХМЛ к ингибиторам Bcr-Abl при ингибировании CDK8 / 19. Работа проведена на Bcr-Abl-положительных линиях ХМЛ K562 и KU812. Распределение фаз клеточного цикла и параметры гибели клеток исследованы в проточной цитофлуориметрии. Для изучения экспрессии генов проведены количественная ПЦР в реальном времени и РНК-секвенирование. Нокаут целевых генов проводился с помощью системы CRISPR / Cas9. Изменения белков (тотальных и фосфорилированных) исследовали в иммуноблоттинге. Для селективного ингибирования CDK8 / 19 использовали сенексин Б, для подавления Bcr-Abl – иматиниб. Установлено, что сенексин Б в моновоздействии не оказывает антипролиферативный эффект на клетки ХМЛ. В линии K562 сенексин Б предотвращает вызываемую иматинибом и другими ингибиторами Bcr-Abl задержку в фазе G1 и увеличивает гибель клеток. Механизмы сенситизации включают снижение уровней ингибиторов клеточного цикла p27 и p18, увеличение расщепления поли (АДФрибозо)полимеразы и активацию каспаз 3 и 9, а также понижение фосфорилирования STAT3 Ser727 и увеличение c-Myc. Сравнение транскриптомов выявило отдельные гены и их кластеры (сигнальные пути), дифференциально регулируемые сенексином Б, иматинибом и комбинацией. В гиперчувствительной к иматинибу линии KU812 сенситизация сенексином Б не выявлена. Ингибирование CDK8 / 19 способствует преодолению блока клеточного цикла, вызываемого антагонистом Bcr-Abl в клетках ХМЛ, и усилению гибели опухолевых клеток. Отсутствие общерезорбтивной токсичности ингибиторов CDK8 / 19 при длительном применении в экспериментальных условиях позволяет рекомендовать данные блокаторы для сочетания с таргетной терапией Bcr-Abl-положительных опухолей.