ИСТИНА

Для повышения продуктивности сельскохозяйственных растений используют композиции, состоящие из симбиотических и несимбиотических азотфиксирующих организмов. Среди диазотрофных микроорганизмов наиболее перспективными представляются цианобактерии (Cyanophyta), поскольку они фиксируют атмосферный молекулярный азот, и, в отличие от гетеротрофных азотфиксаторов, не требуют наличия в почве уже готового органического вещества. Целью являлось молекулярное типирование цианобактериального изолята PTV, эффективного при проведении альгализации почв живыми культурами фотосинтезирующих и азотфиксирующих микроорганизмов. В составе альго-ризобиальных композиций этот изолят стимулировал энергию прорастания, всхожесть семян, способствовал увеличению длины и количества сформированных проростков люцерны и сои. Для молекулярного генотипирования изолята PTV в ходе полимеразной цепной реакции были амплифицированы соответствующие фрагменты хромосомной ДНК, содержащие рибосомальный генный кластер (ген 16S pРНК, внутренний транскрибируемый спейсер 16S-23S рРНК и часть гена 23S рРНК) и часть nifH гена, кодирующего редуктазу нитрогеназы, фермента, осуществляющего фиксацию атмосферного азота. Синтезированные 1765 п.н. фрагмент, несущий гены рибосомального кластера, и 343 п.н. фрагмент nifH гена были клонированы в бактериальном векторе и подвергнуты секвенированию. Анализ нуклеотидных последовательностей осуществляли с помощью программы BLAST (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/viewer). Филогенетический анализ нуклеотидных последовательностей проводили с помощью программы MEGA 5.1 (http://www.megasoftware.net/). Сравнение полученных нуклеотидных последовательностей с общей коллекцией таковых в генных банках (GenBank+EMBL+DDBJ) показало, что изолят PTV не имеет полного сходства ни с одним из ранее исследованных организмов. Последовательности из базы данных GenBank (NCBI), обладающие 88-99% сходством с анализируемыми последовательностями (BLAST NCBI), выравнивали в программе MEGA 5.1 (MUSCLE). Для филогенетических построений использовали алгоритм ML (Maximum Likelihood) с бутстреп поддержкой (1000 итераций). При сравнении нуклеотидных последовательностей 16S РНК гена цианобактерия кластеризуется с высоким уровнем бутстреп поддержки с Nostoc sp. HA4355-MV2. Достаточно близко к этой паре находится Nostoc muscorum. При использовании в качестве молекулярного маркера гена nifH исследуемая цианобактерия попадает в один кластер с Nostoc muscorum. Изучаемый изолят назван нами в память безвременно ушедшей Паршиковой Татьяны Викторовны, инициировавшей эти исследования, как Nostoc PTV.