ИСТИНА

Белок Est3 является компонентом теломеразного комплекса дрожжей Saccharomyces cerevisiae.Теломераза необходима для поддержания стабильности генома , поскольку решает проблему недорепликации концов ДНК , добавляя G- богатые теломерные ДНК повторы на концах хромосом . Делеция гена белка Est3 приводит к прогрессирующему укорочению теломер в ряду поколений , приводящему к сенессенсу и гибели клетки . Дрожжи , у которых удален ген est3, способны прожить всего лишь около 80 поколений 1 . Предполагается , что белок Est3 играет важную роль в регуляции активности теломеразы , однако его функция до сих пор неизвестна . Ранее было показано , что Est3 способен специфично связываться с олигонуклеотидами , содержащими теломерные повторы , а эффективность связывания зависит от присутствия GTP или GDP 2 . Согласно одной из распространенных гипотез , G- богатые теломерные 3’- концы хромосом образуют G- квадруплексы . В данной работе с помощью EMSA показано , что Est3 способен связываться именно с ДНК-квадруплексами , образованными теломерными повторами дрожжей S. cerevisiae. Добавление GTP приводит к более эффективному связыванию , в то время как GDP ингибирует взаимодействие . Более детально взаимодействие Est3 с G- квадруплексами было изучено методом DMS- пробинга , позволившим зафиксировать изменения в структуре квадруплекса , вызванные взаимодействием с Est3. Взаимосвязь между ГТФазной активностью Est3 и способностью связываться с G- квадруплексами подтверждается результатами экспериментов с использованием негидролизуемого аналога ГТФ , а так же с мутантным белком D86A Est3, не способным гидролизовать ГТФ . Способность Est3 связываться с G- квадруплексами в зависимости от гидролиза ГТФ может иметь значение для регуляции теломеразной активности in vivo благодаря изменению взаимодействию с теломерными повторами на концах хромосом.