ИСТИНА

Доксорубицин (Dох) является препаратом, широко применяющимся в химеотерапии опухолей различного происхождения. Dох интеркалирует в двойную спираль ДНК, вызывая ее разрывы. Исследования популяций клеток, выживших после воздействия химиотерапевтическими препаратами в настоящее время крайне востребованы, т.к. такие клетки могут являться источником возникновения новых опухолей и метастазирования. Для оценки выживаемости клеток А431 (эпидермоидная карцинома человека) в присутствии Dox и после удаления агента использовался метод МТТ. Анализ плоидности клеток проводился методом проточной цитофлуориметрии. Морфометрические исследования (интенсивность флуоресценции DAPI, форма клеток и подвижность) проводились в программе Fiji-ImageJ. Воздействие 0,25 мкМ и 0,5 мкМ мкМ Dох (48 ч) вызывает гибель 25 и 30 % клеток соответственно. Апоптотический индекс (48 ч) составляет 4,38±0,15 % (0,25 мкМ) и 2,88±0,9 % (0,5 мкМ). После удаления Dох наблюдается либо гибель всех клеток (0,5 мкМ), либо постепенное восстановление популяции в течении 30 сут (0,25 мкМ). В присутствии 0,25 и 0,5 мкМ Dox в популяции увеличиваются доли клеток, находящихся на стадиях S и G2/М клеточного цикла. При этом анализ интенсивности флуоресценции (ИФ) DAPI показал увеличение медианы ИФ при воздействии 0,25 мкМ Dox в 3 раза и в 5 раз на 7 сут. после удаления Dox. Увеличение плоидности происходит как в одноядерных, так и в микроядерных клетках. По данным прижизненных исследований и анализу митотического индекса, такое значительное увеличение плоидности клеток не сопровождается вступлением в митоз. Через 30 дней после удаления Dox медиана ИФ возвращается к уровню контроля. При этом сохраняются клетки с повышенной ИФ. Нормализация плоидности культуры сопровождается увеличением числа митозов (2,5±0,2%) (в том числе патологических) при сохранении апоптотического индекса на уровне 2±0,4%. Воздействие 0,25 и 0,5 мкМ Dox вызывает появление клеток вытянутой формы (29% и 22% соответственно; 5,3% в контроле) у которых длина превышает ширину более чем 2 раза. По данным прижизненных наблюдений скорость движения таких клеток в 3,8 раза выше по-сравнению с контрольными клетками. Таким образом, проведенное исследование показало, что воздействие определенных доз Dox на клетки эпидермоидной карциномы человека А431 может вызывать увеличение плоидности (по-видимому, путем эндоредупликаци), изменение формы и усиление подвижности (что может способствовать метастазированию). В дальнейшем полиплоидные клетки вступают в патологические митозы. Часть дочерних клеток при этом подвергается гибели. Восстановление популяции выживших клеток происходит через 30 сут. после удаления Dox и сопровождается нормализацией плоидности.