ИСТИНА

В данной работе мы разработали метод дифференцировки человеческих эмбриональных стволовых клеток (ЭСК) и индуцированных плюрипотентных стволовых клеток (ИПСК) в направлении ППК, в условиях как адгезивной клеточной культуры, так и в виде свободно плавающих эмбриоидных телец (ЭТ). Мы показали, что, в случае дифференцировки на адгезивном субстрате важно придерживаться оптимального размера и рассеяния первоначальных клеточных колоний, что увеличивает эффективность дифференцировки. В случае использования ЭТ также было показано, что увеличение эффективности дифференцировки связано с уменьшением первоначального количества клеток в одном ЭТ. Разработанный протокол дифференцировки включает в себя две ступени: индукция дифференцировки ЭСК и ИПСК до стадии ранней мезодермы, с последующей дифференцировкой при помощи BMP4 в ранние ППК. При помощи прижизненной окраски на маркер ППК SSEA1 с последующим сортировкой нам удалось получить чистые популяции ППК из гетерогенных смесей. Чистые популяции ППК были жизнеспособны после сортировки и были способны к пролиферирации в течении нескольких пассажей, во время которых также происходило их дальнейшее созревание.