ИСТИНА

Одним из существенных признаков репликативного старения культивируемых клеток является уменьшение клеточной подвижности и реорганизация цитоскелета [1, 2]. Исследование направлено на изучение изменений в организации сократительного аппарата и особенностей распределения малой ГТФазы RhoA в дермальных фибробластах (DF2) на различных стадиях репликативного старения. Клеточная линия DF2 является неиммортализованной клеточной линией человека, имеющей статус мезенхимных стволовых клеток [3]. На клетках DF2 показано активное репликативное старение в процессе культивирования в течение 8–26 пассажей. RhoA ГТФаза выполняет множество функций в регуляции белков цитоскелета, клеточной морфологии и миграции наряду с различной пролиферативной и транскрипционной активностью в клетках [4]. Клетки DF2 культивировали на протяжении 8–26 пассажей (считая от разморозки). Методами конфокальной микроскопии и анализа иммунофлюоресцентных изображений (рис. 1) была исследована динамика колокализации белка RhoA с ядром (ДНК) и с F-актином. Для оценки колокализации измеряли коэффициент корреляции Кендалла (bTau) между изображениями, полученными в двух цветовых каналах. Для оценки структурной целостности актинового цитоскелета был произведен анализ его локальной фрактальной размерности (D) [5]. Анализ коэффициентов bTau показал, что перераспределение Rho из цитоплазмы в ядро является немонотонным процессом, наложенным на убывающий тренд. Максимальные значения коэффициента bTau наблюдали на 13 и 18 пассажах, минимальные – на 12 и 20 пассажах (рис. 2(б, в)). На данный момент роль RhoA в ядре мало понятна и подлежит дальнейшему исследованию. В ходе анализа фрактальной размерности актинового цитоскелета обнаружено, что в первоначальное снижение D в ходе культивирования сменяется его увеличением, с минимальным значением на 11 пассаже и максимальным – на 15 пассаже (рис. 3). Эти результаты свидетельствуют об обратимом снижении структурной целостности актинового цитоскелета в процессе репликативного старения. ЛИТЕРАТУРА 1. Turinetto V., Vitale E., Giachino C. Senescence in human mesenchymal stem cells: functional changes and implications in stem cell-based therapy // International journal of molecular sciences. – 2016. – V. 17. – N 7. – P. 1164. 2. Bobkov D. et al. Replicative senescence in MSCWJ-1 human umbilical cord mesenchymal stem cells is marked by characteristic changes in motility, cytoskeletal organization, and RhoA localization // Molecular Biology Reports. – 2020. – V. 47. – N 5. – P. 3867-3883. 3. Крылова Т.А. и др. Получение и характеристика неиммортализованных клеточных линий дермальных фибробластов человека, выделенных из кожи век взрослых доноров разного возраста // Цитология. – 2016. – V. 58. – N 11. – С. 850-864. 4. Kim J.G. et al. Regulation of RhoA GTPase and various transcription factors in the RhoA pathway // Journal of Cellular Physiology. – 2018. – V. 233. – N 9. – P. 6381-6392. 5. Alhussein G. et al. A spatiotemporal characterization method for the dynamic cytoskeleton // Cytoskeleton. – 2016. – V. 73. – N 5. – P. 221-232.