ИСТИНА

Метилирование ДНК является важным элементом эпигенетической системы у подавляющего большинства организмов. У млекопитающих метилированию главным образом подвергаются остатки цитозина в составе CpG-сайтов ДНК. Совокупность модифицированных участков, называемая профилем метилирования, создается de novo в процессе эмбриогенеза ДНК-метилтрансферазой (МТазой) DNMT3A. DNMT3A содержит в своем составе домен PWWP, отвечающий за привлечение фермента к гетерохроматину за счет узнавания триметилированного 36-ого лизина в гистоне H3 (H3K36me3). В раковых клетках наблюдается нарушение профиля метилирования ДНК. Известно, что у 25% пациентов с острым миелоидным лейкозом (ОМЛ) встречаются точечные мутации в гене DNMT3A. Целью настоящего исследования стало установление влияния мутаций, найденных у больных ОМЛ в PWWP-домене DNMT3A, на работу фермента. В качестве модели была использована Dnmt3a мыши, поскольку данный белок высоко гомологичен DNMT3A человека. Проведен анализ мутаций в гене DNMT3A, найденных у пациентов с гематологическими заболеваниями Изучен возможный эффект мутаций в контексте известной третичной структуры PWWP-домена. На основе этих данных выбрано несколько мутаций для дальнейшего исследования. Были выделены и очищены мутантные формы изолированного PWWP-домена с N-концевым GST-тагом. Методом поляризации флуоресценции исследовано связывание мутантных форм домена GST-PWWP с 30-звенным флуоресцентно-меченным ДНК-субстратом, а также с флуоресцентно-меченным 19-звенным пептидом, имитирующим «хвост» гистона H3, несущего модификацию H3K36me3. В перспективе планируется оценка возможных последствий наличия мутаций в гене DNMT3A у пациентов с ОМЛ для прогрессии опухолевого процесса.