ИСТИНА

Целью работы было изучение недавно открытого механизма обратимого взаимодействия и регулирования цитохромоксидазы (ЦО) стероидными гормонами и близкими им по структуре соединениями. Впервые показано, что стероидные половые гормоны эстрадиол и тестостерон, как и прогестерон и дегидроэпиандростерон, секостероид витамин Д3, а также тиреоидный гормон трийод-тиронин (Т3) подавляют активность ЦО, выделенной из митохондрий сердца быка со значениями константы ингибирования (Кинг) в диапазоне 10-5-10-4 М. Все эти лиганды представляют типичные амфифильные соединения, способные связываться с амфипатической полостью, обнаруженной группой Фергюсон-Миллер в 3-х мерной структуре ЦО из бактерии Rhodobacter sphaeroides и из сердца быка. Полость расположена вблизи входа в протонный канал К-. Группа Фергюсон-Миллер обнаружила в полости связанные желчные кислоты, поэтому сайт был назван Центром Связывания Желчных Кислот ( ЦСЖК). ЦСЖК также связывает додецил-мальтозид (ДМ), мягкий детергент, добавляемый к буферу для солюбилизации ЦО. Все исследованные гормоны конкурировали с ДМ за место связывания в соотношении 1:1. Эстрадиол и витамин Д3 также индуцировали длинноволновый сдвиг полосы Соре окисленной ЦО. Разностный спектр с минимумом при 415нм и максимум при 437нм и молярной экстинкцией 10мМ-1см-1 (для 1мМ эстрадиола) составляет примерно 20% от амплитуды максимального спектрального ответа, вызываемого цианидом. В то время как стероидные гормоны существенно ингибировали общую оксидазную активность ЦО, они практически не оказывали влияния на парциальную пероксидазную активность фермента. Такой специальный тип ингибирования ЦО был описан ранее как результат действия мутаций внутри протонного канала К- и согласуется с предположением группы Фергюсон-Миллер, что амфифильные лиганды ЦСЖК могут нарушать транспорт протонов по К-каналу, которое основывалось на структурных данных о расположении ЦСЖК вблизи входа в К-канал. В противовес стероидным гормонам Т3 ингибировал как оксидазную, так и пероксидазную активности ЦО, поэтому механизм его воздействия на ЦО, по-видимому, иной. Полученные результаты указывают на новый путь, которым гормоны могут воздействовать на окислительное фосфорилирование: прямое взаимодействие и моделирование активности ЦО, ключевого фермента дыхательной цепи.