ИСТИНА

Белок человека Ku выполняет в клетке множество функций, главной из которых является участие в репарации двуцепочечных разрывов в ДНК по механизму негомологичного соединения концов. Существуют данные рентгено-структурного анализа комплекса Ku с ДНК, которые хорошо объясняют механизм прочного связывания этого белка с концом ДНК. Однако помимо репарации, Ku участвует также в регуляции репликации, транскрипции и трансляции, поддержании целостности теломер и ряде других процессов, в которых Ku связывается с внутренними, а не концевыми областями ДНК или РНК. Механизм такого связывания пока непонятен. Большинство клеточных функций Ku выполняет в виде гетеродимера Ku70/Ku80, однако субъединица Ku70, очевидно, может самостоятельно функционировать в цитоплазме клетки, взаимодействуя как с ДНК, так и с РНК. С целью изучения механизмов взаимодействия гетеродимера Ku и его субъединицы Ku70 с нуклеиновыми кислотами (НК) мы отработали методики получения этих белков в E. coli и исследовали их связывание с различными структурами ДНК и РНК. Оказалось, что субъединица Ku70 значительно более специфична к вторичной структуре НК: эффективное связывание наблюдалось только с двуцепочечной ДНК и РНК-шпилькой определенной структуры. С использованием делеционных мутантов Ku70 впервые было обнаружено, что связывание этих ДНК и РНК происходит в разных сайтах: ДНК-дуплекс взаимодействует с С-концевым районом белка, а РНК-шпилька связывается в центральном участке Ku70. Гетеродимер Ku, как установлено, обладает сравнимой аффинностью к различным структурам ДНК: одно- и двуцепочечным, а также шпилькам. В случае РНК, мы наблюдали связывание гетеродимера Ku с одно- и двуцепочечными молекулами, однако его сродство к РНК-шпилькам оказалось достоверно выше.