ИСТИНА

В работе были исследовано взаимодействие альфа-синуклеина, основного компонента телец Леви, с глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназой. Нами было доказано, что определенные типы пост-трансляционной модификации (прежде всего, окисление цистеиновых остатков активного центра) вызывают индукцию апоптоза, а лекарственные препараты против болезни Паркинсона на основе производных депренила взаимодействуют именно с этим белком-мишенью. Кроме того, определенные ненативные формы ГАФД могут не только индуцировать апоптоз, но и связываться с амилоидогенными белками. Взаимодействие ГАФД человека, ее нативной и окисленной форм, и альфа-синуклеина изучали методом твердофазного иммуноферментного анализа (ELISA). В качестве антигенов выступали синуклеин, нативная или окисленная ГАФД. Было показано, что синуклеин безусловно взаимодействует с окисленной формой ГАФД. Сделать однозначный вывод о взаимодействии альфа-синуклеина с нативной ГАФД из этих опытов невозможно, так как для интерпретации данных необходимы антитела против нативной ГАФД, а связывание синуклеина с адсорбированной на планшете нативной ГАФД может быть объяснено изменением конформации фермента при взаимодействии со стенками лунки. Для проверки полученных данных нами были проведены эксперименты с использованием метода плазмонного резонанса. Также с помощью этого метода изучили связывание синуклеина с другим амилоидогенным белком – овечьим прионом. На чип был сначала иммобилизован рекомбинантный овечий прионный белок, а затем пропущен альфа-синуклеин. Было показано, что образование комплекса приона с синуклеином происходит с очень высокой скоростью, причем самопроизвольно полученный комплекс практически не диссоциирует. Повышение ионной силы также не приводит к его диссоциации. Тот же чип, содержащий двойной белковый комплекс прион-синуклеин был использован для изучения связывания синуклеина с окисленной формой ГАФД. По сути, в такой постановке эксперимента он аналогичен популярному методу использования антител, ковалентно связанных с матрицей, для изучения взаимодействий между белками. На чип с ковалентно иммобилизованным овечьим прионным белком и адсорбированном на нем альфа-синуклеином наносили предварительно окисленную ГАФД. Было показано, что образование комплекса окисленной ГАФД с синуклеином происходит со скоростью 1,51*105 М-1с-1. Однако полученный комплекс самопроизвольно диссоциирует. Работа была поддержана грантом РФФИ №16-34-01267 мол_а