ИСТИНА

Исследования морфогенетического потенциала клеток и возможность их дифференцировки в различные клеточные типы являются одними из наиболее актуальных вопросов современной биологии. Фенотипическая пластичность клеток является одним из факторов, необходимых для поддержания гомеостаза, а также для обеспечения регенерации при повреждениях и заболеваниях. В работе исследовали влияние панкреатической дифференцировки клеток поднижнечелюстной слюнной железы (КСЖ) мыши и человека в 2D и 3D условиях на экспрессию и синтез гормонов-маркеров клеток, составляющих островки Лангерганса поджелудочной железы. Клетки подвергали дифференцировке по оригинальному протоколу, после чего проводили сравнение фенотипа методами ПЦР-РВ и иммуноцитохимического анализа. Методами ПЦР-РВ было показано, что после панкреатической дифференцировки КСЖ мыши наблюдается рост экспрессии генов транскрипционных факторов, необходимых для формирования эндокринных клеток, а именно Pdx1, Nkx2.2, Pax6, Hnf-6, и снижается экспрессия генов Hes-q b Ptf1a, необходимых для формирования протоков и ацинусов поджелудочной железы. Панкреатическая дифференцировка КСЖ человека также приводит к росту экспрессии вышеперечисленных генов транскрипционных факторов эндокринной направленности, а также приводит к росту экспрессии генов Ngn3 и MafA, участвующих в формировании бета-клеток поджелудочной железы. У клеток мыши после панкреатической дифференцировки наблюдается рост экспрессии генов-маркеров эндокринных клеток поджелудочной железы, таких как Ins, SST, PPY и Gluc. Использование трехмерного способа культивирования КСЖ мыши позволяет увеличить экспрессию генов-маркеров и генов интересующих транскрипционных факторов на 8-10%. Похожая картина наблюдается и для КСЖ человека, а в случае генов Ins, MafA и Pax6 удается получить более чем трехкратного роста экспрессии. Иммуноцитохимическое окрашивание после панкреатической дифференцировки выявило наличие в клетках только инсулина и проинсулина - маркеров бета-клеток островков Лангерганса. При использовании метода трехмерного культивирования иммуноцитохимический анализ с использованием криосрезов и конфокальной микроскопии показал также присутствие соматостатина, глюкагона, и панкреатического полипептида. Более того, отчетливо видна колокализация этих гормонов в одних и тех же клетках. Таким образом, использование трехмерного способа культивирования при панкреатической дифференцировке КСЖ повышает ее эффективность. В результате работы был показан синтез белков-маркеров различных типов клеток островков Лангерганса. Колокализация этих белков, в свою очередь, позволяет провести параллели с эмбриональными полигормональными клетками зачатка поджелудочной железы.