ИСТИНА

Родамин 123 – флуоресцентный зонд, широко используемый для оценки значений митохондриального мембранного потенциала. Механизм накопления и удержания красителя в разных типах клеток недостаточно изучен, однако имеются данные о различном удержании зонда опухолевыми и здоровыми клетками. Целью данной работы является сравнение процессов накопления, удержания и метаболизма родамина 123 в клетках астроцитов и глиомы. Клетки астроцитов и глиомы C6 инкубировали с родамином 123 (2 uM) в течение 2 часов. Бутанольный клеточный экстракт анализировали методами ТСХ и масс-спектрометрии для определения продуктов метаболизма красителя. Для оценки зависимости удержания зонда от уровня мембранного потенциала к клеткам после их инкубации с исходным зондом добавляли разобщитель CCCP. Результаты регистрировали на флоуресцентном микроскопе Axio Vert.A1. Для оценки возможного участия цитохрома P450 в метаболизме красителей клетки инкубировали одновременно с родамином 123 и ингибитором фермента амиодароном (2 uM). Результаты оценивались с использованием проточной цитофлуориметрии и статистически обрабатывались в Flowing Software. Результаты. Обнаружены различия в метаболизме родамина 123 в астроцитах и клетках глиомы. В частности, в клетках глиомы зарегистрировано наличие производных родамина 123, в том числе с большей молекулярной массой чем у исходного красителя. Реакция культур на добавление CCCP также отличалась. Флуоресценция родаминового зонда полностью исчезала через несколько часов после добавления СССP к астроцитам, тогда как в клетках глиомы она сохранялась спустя 24 часа. После инкубации с амиодароном была зарегистрирована более интенсивная флуоресценция в обеих культурах, однако эффект был значительно более выражен в астроцитах. Выводы. Различия в метаболизме родамина 123 в клетках глиомы и астроцитах заключаются в модификации за счет присоединения химических групп к родамину 123 в клетках глиомы и, возможно, в более высоком уровне активности эстераз в клетках глиомы. Предположительно, активность цитохрома P450, участвующего в метаболизме родамина 123, в двух типах клеток различна.