ИСТИНА

Митохондрии являются одним из основных источников активных форм кислорода (АФК) в клетке, а также одной из наиболее важных мишеней окислительного повреждения. Внутренняя митохондриальная мембрана особенно чувствительна к перекисному окислению липидов (ПОЛ), поскольку в ней фосфолипиды (прежде всего кардиолипин), содержащие ненасыщенные жирные кислоты находятся в прямом контакте с компонентами дыхательной цепи, которые продуцируют АФК. Исследования ПОЛ в мембранах митохондрий сильно ограничены отсутствием методов его анализа в живых клетках в реальном времени. Известные флуоресцентные красители чувствительные к ПОЛ равномерно распределяются по клеточным мембранам. Нами был синтезирован митохондриально-направленный сенсор MitoCLox на основе рациометрического зонда C11-BODIPY (581/591), широко используемого для детекции окисленных липидов. В этом сенсоре остаток C11-BODIPY был конъюгирован с помощью линкера с катионом трифенилфосфония (ТРР+). Методами молекуляно-динамического моделирования было показано, что положение чувствительного к окислению участка зонда в бислое соответствует глубине расположения двойных связей в остатках жирных кислот кардиолипина. Анализ распределения зонда в плоскости мембраны указывает на преимущественное взаимодействие с кардиолипином. Свойства нового зонда были изучены на липосомах различного состава, а также на клеточных культурах с использованием методов флуоресцентной микроскопии и проточной цитометрии. В липосомах, состоящих из кардиолипина, MitoCLox регистрирует кинетику окисления липида, не является антиоксидантом и не интерферирует с действием ТРР-содержащего митохондриально-направленного антиоксиданта SkQ1. MitoCLox избирательно накапливается в митохондриях клеток и эффективно детектирует ПОЛ митохондриальной мембраны в условиях окислительного стресса, вызванного различными стимулами. SkQ1 блокировал окисление MitoCLox но слабо влиял на общий уровень окислительного стресса вызванного добавкой перекиси водорода. Таким образом, новый зонд избирательно регистрирует окисление липидов мембраны митохондрий.