ИСТИНА

Для ускорения поиска лекарств - простая, надежная и экономически эффективная система с высокой пропускной способностью. требуется выявление потенциального антибиотического механизма действия. Чтобы облегчить такой скрининг новых антибиотики, мы создали систему двойного репортера для обнаружения не только антимикробной активности, но и одновременная сортировка потенциальных противомикробных препаратов на те, которые вызывают остановку рибосомы, и те, которые вызывают SOS ответ из-за повреждения ДНК. Ген дальнего красного флуоресцентного белка, katushka2S, был вставлен ниже по течению от аттенюатора триптофана, в котором два триптофановых кодона были заменены аланиновыми кодонами, с одновременная замена дополнительной части аттенюатора для сохранения способности образовывать вторичную структуры, которые влияют на завершение транскрипции. Этот генетически модифицированный аттенюатор делает возможным Экспрессия Katushka2S только при воздействии соединений, задерживающих рибосому. Новый репортер не только помогает идентифицировать новые антибиотики, нацеленные на рибосомы, но также дает новую информацию о механизме действия старых из них. С помощью этого репортера был обнаружен новый ингибитор трансляции, поликетидный антибиотик тетраценомицин X (TetrX). TetrX был открыт более 30 лет назад, но из-за его структурного сходства с даунорубицином он был считается интеркалятором ДНК. Мы показали, что TetrX ингибирует трансляцию in vivo и in vitro. Мутации в G2609 и U2586 23S рРНК обеспечивают устойчивость к TetrX, A2058,2059 и U2585 защищены от химическая модификация, поэтому сайт связывания TetrX должен находиться в выходном туннеле пептида, близко к макролидному связыванию сайт. TerX также похож на тетрациклин, но сайт связывания и способ действия должны отличаться. Посредством Для анализа печати мы определили, что TetrX останавливает рибосому на мРНК и его активность сильно зависит от последовательности пептида, и на активность влияют не только кодоны в сайтах А и Р, но и аминокислоты в положении -1, -2, -3 и -4 к P-сайту. TetrX также может препятствовать завершению, но опять-таки длина и Последовательность пептидной цепи важна для этой активности. Работа выполнена при поддержке Российского научного фонда (грант 18-44-04005) для И.А.О.