ИСТИНА

Нейробластома является одной из наиболее агрессивных детских опухолей с высоким инвазивным потенциалом и риском метастазирования [2]. Молекулярные основы прогрессирования нейробластомы во многом остаются неясными. Эпителиально-мезенхимальный переход (ЭМП) – один из основных механизмов регуляции инициации инвазии и метастазирования опухолевых клеток [4], поэтому изучение молекулярных основ и способов его регуляции является перспективным в свете предотвращения риска метастазирования. Ранее нами было показано, что подавление экспрессии рецептора урокиназы uPAR с помощью технологии CRISPR/Cas9n [1, 3] существенно снижает пролиферацию клеток нейробластомы мыши Neuro2a по механизму, связанному с запуском апоптоза и снижением экспрессии рецептора нейротрофина TrkC, опосредующего выживаемость нейрональных клеток. В настоящем исследовании нами впервые показано, что подавление экспрессии uPAR в клетках Neuro2a с использованием CRISPR/Cas9n активирует ЭМП. Мы обнаружили существенное (в 2,5 раза) увеличение миграции uPAR-дефицитных клеток (in vitro анализ миграции в рану, p<0,01, ANOVA), характерные изменения морфологии uPAR-дефицитных клеток: увеличение в 1,3 раза размера клеток (p<0,0001, ANOVA), снижение способности формировать колонии (p<0,05, ANOVA). При подавлении uPAR в клетках наблюдалось снижение экспрессии белков-маркеров эпителиальных клеток (E-кадгерина, окклюдина и клаудина-5) и увеличение экспрессии белков-маркеров мезенхимальных клеток (IL-6, N-кадгерина и α-гладкомышечного актина). На уровне мРНК нами было обнаружено увеличение в 2,6 раз экспрессии транскрипционного фактора Snai1 (p<0,01, t-тест), участвующего в запуске ЭМП. Таким образом, полученные нами данные впервые указывают на новый механизм регуляции ЭМП, инвазии и метастазирования опухолевых клеток, ассоциированный с экспрессией uPAR, что позволяет его рассматривать в качестве перспективной мишени для поиска новых подходов для снижения риска развития метастаз при лечении опухолей.