ИСТИНА

Среди хроматографических методов хроматофокусирование отличается возможностью концентрирования аналитов непосредственно на разделяющей колонке, без применения концентрирующих патронов и предколонок – т.е. в варианте on-line. Эта возможность появляется благодаря рН-градиентному режиму элюирования, при котором стартовый буферный раствор, уравновешивая сорбент до начального значения рН, одновременно переводит функциональные группы сорбента в активную форму, повышает нагрузочную емкость хроматографической колонки, тем самым позволяет полностью насытить колонку аналитами. Затем, при пропускании буферного элюента с отличающимся рН, в слое сорбента формируется квазилинейный градиент рН, и сорбированные аналиты элюируются на определенном участке градиента. Функциональные группы ионообменных сорбентов представлены первичными и вторичными аминогруппами у слабоосновных анионообменников, карбоксигруппами у слабокислотных катионообменников, проявляющими комплексообразующие свойства. Это позволяет использовать хроматофокусирование для предварительного концентрирования ионов металлов из разбавленных нейтральных или слабокислых растворов. Для последующего элюирования внутри хроматографической колонки создают градиент с нисходящим рН, способствующий постепенному разрушению комплексов ионов металлов с группами сорбента. На колонках для ВЭЖХ, заполненных сорбентами MN (сверсшитый полистирол с карбоксильными группами), Ольвагель-СООН и MacroPrep 50 CM (полиметилметакрилат с карбоксильными и карбоксиметильными группами, соотвественно), в динамических условиях изучено концентрирование кинетически лабильных ионов металлов из разбавленных растворов (1-2х10-5 М). При элюировании 0,5-1 мМ раствором лимонной кислоты в условиях градиента с нисходящим рН наблюдали симметричные узкие пики, что подтверждает фокусирующий эффект и в случае полностью насыщенной аналитом колонки. В динамических условиях для ионов металлов достигнуты коэффициенты концентрирования на уровне 0,7-1,5х102 и выше. Ионы металлов из колонки десорбируются количественно. Нами была показана возможность использования в хроматофокусировании сильнокислотных сульфокатионитов, ранее считавшихся непригодными для этого метода [1]. Используя простые элюенты на основе фосфатного или цитратного буферного раствора, на сульфокатионитах в условиях градиента рН можно разделять пептиды или аминокислоты. Однако возможность предварительного концентрирования аналитов на сульфокатионитах в варианте хроматофокусирования ранее не изучали. Проверена возможность динамического концентрирования на сорбенте AN-3 (разработан на кафедре физической химии МГУ) в условиях градиента с восходящим рН на примере 2х10-4 М пролина. Содержание пролина в элюате контролировали по реакции с нингидрином. Хроматографический пик при градиентном элюировании после on-line концентрирования имеет более симметричную и острую форму, чем наблюдали для пролина на сорбенте AN-3 в изократических условиях.