ИСТИНА

Рекомбинантные белки являются критически важными объектами в биотехнологическом производстве. Потребность в их получении растет с каждым годом. Транзиентная трансфекция – это удобный и относительно быстрый метод наработки как аналитических, так и препаративных количеств целевого белка. В настоящее время многие системы для транзиентной трансфекции представлены готовыми наборами, включающими все необходимые компоненты. Замена некоторых элементов из такого набора на альтернативные позволяют расширить границы использования системы, снижая зависимость ученого от определенных производителем условий. В работе рассматриваются способы получения рекомбинантных белков в системе транзиентной трансфекции на базе суспензионных клеток Expi293F. В базовой комплектации производителя набор содержит клетки, жидкую среду, реагент для трансфекции и энхансеры. Подобранные условия обеспечивают рост клеток до плотностей более 6 млн/мл, что позволяет получать рекомбинантные белки в количествах более 100 мг/л культуры за 5-6 дней. Препаративные количества целевых белков получали по стандартному протоколу, основанному на рекомендациях производителя, а также в нескольких его модификациях с использованием альтернативных компонентов. Было исследовано три модификации протокола. 1 – сохранение исходных компонентов системы, котрансфекция белком-регулятором метаболизма (SV40T large T antigen). В данном варианте продукция рекомбинантных белков увеличивалась на 25-50%, по сравнению со стандартным протоколом. 2 – частичная замена компонентов системы на альтернативные (реагент для трансфекции PEI25 в комбинации с вальпроатом натрия), котрансфекция белками-регуляторами клеточного цикла (p18, p21, p27, aFGF). При этом уровень продукции целевого белка существенно не изменялся, но снижалась себестоимость процесса. 3 - полная замена компонентов среды на альтернативные (лиофилизированная среда, реагент PEI25, энхансер вальпроат натрия, подпитка). В данном варианте уровень продукции целевого белка оставался прежним или увеличивался на 20-30% по сравнению со стандартным протоколом. Таким образом, в работе показана возможность модификации имеющейся системы для транзиентной трансфекции Expi293F с полным или частичным отказом от исходных компонентов. Благодаря этому удается снизить зависимость от поставщика, а также продлить срок хранения расходных материалов, тем самым повышая надежность процессов получения рекомбинантных белков.