ИСТИНА

Поиск новых потенциальных антибиотиков является важной и актуальной задачей, поскольку представляет интерес как с фундаментальной точки зрения, позволяя по-ново- му взглянуть на механизм действия различных антибиотиков на центральные процессы в жизни бактериальной клетки, так и с практической - разработка новых антимикробных агентов, обладающих большей специфичностью или большим спектром действия. Около половины применяемых в настоящее время антибиотиков действуют на рибо- сому. При этом механизмы их действия могут быть различными: некоторые вызывают ошибки в ходе синтеза белка, другие замедляют скорость трансляции или блокируют ри- босому на разных стадиях ее функционального цикла. Определение механизма действия является необходимым шагом на пути создания лекарственного препарата. Разработан- ный уникальный метод, позволяющий проводить широкомасштабный анализ тысяч но- вых потенциальных антибактериальных агентов in vivo, одновременно дает возможность определять и эффективность ингибирования клеточного роста, и механизм действия те- стируемых соединений, не требуя много времени и затрат на дополнительные субстраты. В основе данного метода лежит использование созданной репортёрной конструкции pDualrep2, позволяющей детектировать потенциальные ингибиторы биосинтеза белка на- ряду с индукторами SOS-ответа. Благодаря использованию вышеописанного подхода были протестированы библиоте- ки, насчитывающие свыше 50 тысяч различных соединений. Часть из них составляли уже известные антибиотики или их производные, для которых не было до сих пор описано детального механизма действия. Другая часть была представлена ранее не изученными антибактериальными агентами. Для активных соединений, отобранных в качестве потен- циальных кандидатов, в первую очередь, на ингибиторы биосинтеза белка, представляю- щих интерес для дальнейшего изучения, были проведены эксперименты in vivo и in vitro по определению степени их активности. В результате были выделены отдельные группы веществ, требующих тщательного анализа в ряду последующих экспериментов. Мы разработали систему широкомасштабного поиска новых потенциальных антибио- тиков среди библиотек из тысяч разных соединений, позволяющей с наименьшими за- тратами определять одновременно и активные антибактериальные агенты, и механизм их действия. В то же время нами подготовлена ступенчатая схема экспериментов по отбору самых активных соединений, детальному определению механизма их действия. И наконец, данный подход успешно был применен на большой выборке соединений, среди которых нашлось несколько потенциальных кандидатов для дальнейшего исследования.