ИСТИНА

В последние годы появились новые, эффективные способы терапии синдрома приобретенного иммунодефицита человека (СПИД), вызываемого вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ). Высокоактивная антиретровирусная терапия позволяет сдерживать болезнь, что дает возможность ВИЧ-инфицированным вести нормальный образ жизни. Однако у носителей ВИЧ могут развиваться различные патологические процесс, в частности, с высокой частотой развиваются опухоли (особенно лимфома Беркитта). Эта лимфома распространена у населения Африки и крайне редко встречается у европейцев. Причины повышенной частоты встречаемости лимфомы Беркитта у ВИЧ-инфицированных пациентов не выявлены. Выяснение этого вопроса невозможно без детального знания механизмов взаимодействия компонентов ВИЧ и клетки. В особенности это касается Tat-белка, который может выделяться в кровь пациентов, воздействуя на неинфицированные ткани. Главной задачей заявляемого проекта является изучение механизмов взаимодействия транскрипционного фактора вируса иммунодефицита человека Tat с компонентами клетки и его роли в развитии патологических процессов (в частности, лимфомы Беркитта).

In recent years new, effective methods for treatment of human acquired immunodeficiency syndrome (AIDS) caused by human immunodeficiency virus (HIV). Highly active antiretroviral therapy can inhibit the disease, allowing HIV-positive to lead a normal life. However, carriers of HIV may develop various pathological process, in particular, a high frequency develop tumors (especially Burkitt lymphoma). This lymphoma is common in people of Africa and is extremely rare in Europeans. The reasons for the increased incidence of Burkitt's lymphoma in HIV-infected patients have been identified. Clarification of this issue is impossible without a detailed knowledge of the mechanisms of interaction between HIV and the cell components. This is especially true Tat-protein that can be released into the bloodstream of patients, affecting the uninfected tissue. The main objective of the claimed design is the study of the mechanisms of interaction of a transcription factor of human immunodeficiency virus Tat components cells and its role in the development of pathological processes (such as Burkitt's lymphoma).

В 2016 году российская сторона будет проводить подготовительные работы по получению мутантов Tat-белка. Для этого имеющаяся в лаборатории последовательность (получена из NIH AIDS Reagent Program) будет переклонирована в подходящий вектор. Будут получены точечные мутанты по всем аминокислотам сигнала ядрышковой локализации (9 мутантов). Полученные мутанты будут переклонированы в вектор pEGFP-N1. Будет определена эффективность накопления Tat-белка и всех полученных мутантов в ядрышке. Кроме того, будут получены плазмиды, кодирующие сигнал ядрышковый локализации (и девять мутантных форм), слитый с EGFP. Для всех полученных химерных белков будет проведено измерение эффективности накопления в ядрышке. Таким образом, в результате реализации этапа 2016 года будет получена точная характеристика сигнала ядрышковой локализации, выявлены аминокислоты, вносящие наибольший вклад в накопление Tat-белка в ядрышке.

Наша группа специализируется на изучении механизмах накопления белков в разных клеточных структурах, роли нарушения накопления в развитии некоторых патологических процессов. В частности, с использованием разработанного количественного метода оценки накопления белков в ядрышке, группа смогла точно картировать структуру нескольких сигналов ядрышковой локализации и предложить механизм действия этого типа сигналов (Musinova et al., 2011, 2015). Группа активно использует в своей работе методы анализа белков в живой клетке (прижизненные наблюдения, FRAP, BiFC), а также внедряет методы микроскопии с супер-разрешением (в режиме SIM).

Основной целью Проекта являлось выявление механизмов накопления ядрышкового белка фибрилларина в ядре и ядрышке. Так как в фибрилларине не предсказывается ни сигнал ядерной локализации (NLS), ни сигнал ядрышковой локализации (NoLS), можно было предполагать наличие каких-то уникальных механизмов, обеспечивающих накопление белка в ядре и ядрышке. Также мы предположили, что накопление в ядре и ядрышке связано с N-концевым доменом фибрилларином (GAR-домен), который есть у всех эукариот, но отсутствует у архей. Это позволило предположить, что именно этот домен привнес в фибрилларин качества, необходимые ему для эффективного функционирования в составе эукариотической клетки. Ниже суммированы основные результаты выполнения проекта.