ИСТИНА

1. Рассмотрены основные конкурентные схемы создания быстрых проточных тест-систем на основе ЛПИА и ИФиА низкомолекулярных веществ на примере гормона ПГ с использованием золотых наночастиц в качестве метки. Установлено, что использование золотых наночастиц в качестве метки в данных экпресс-методах не позволяет определять уровень ПГ в физиологическом диапазоне концентраций для целей ветеринарной диагностики. 2. Для определения ПГ в ЛПИА и ИФиА предложено в качестве визуальной метки использовать ПХ. Показано, что применение в качестве маркера ПХ в конкурентной схеме позволяет снизить предел обнаружения ПГ более, чем в 10 раз по сравнению с тест-системами на основе коллоидного золота, и достигнуть рабочего диапазона измерения физиологических концентраций ПГ в цельном молоке, необходимого для раннего определения стельности коров. Определены количественные характеристики и условия регистрации ферментной метки в тестовой зоне разрабатываемых тест-систем ЛПИА и ИФиА, рассмотрено влияние структуры и компоновки пористых мембранных компонентов на аналитические характеристики. 3. Разработан метод ЛПИФА для инструментального фотометрического количественного определения ПГ. Предел обнаружения составил 1 нг/мл, рабочий диапазон определяемых концентраций 1 - 40 нг/мл, время проведения одного анализа – 20 мин. Тест-система ЛПИФА апробирована на образцах цельного коровьего молока для определения уровня ПГ в физиологическом диапазоне концентраций, необходимых для раннего выявления стельности. Показана высокая степень соответствия полученных результатов с данными ИФА (коэффициент корреляции 0,97), а также с ректальным методом исследования. При этом чувствительность разработанной тест-системы составила 84%, а специфичность - 100%. 4. Разработан новый высокочувствительный экспресс-тест на основе метода ИФиА с использованием фермента - ПХ в качестве метки - для количественного и полуколичественного определения уровня ПГ в цельном молоке коров. Предел обнаружения составил 0,4 нг/мл. Показана высокая степень соответствия результатов, полученных методами ИФиА и ИФА (коэффициент корреляции 0,96). Достигнутый рабочий диапазон определяемых концентраций ПГ позволяет проводить точную визуальную оценку нестельных коров по принципу "да-нет" без использования инструментальных средств регистрации сигнала в полевых условиях.